人降鈣素原(pct)elisa試劑盒說(shuō)明書

《人降鈣素原(pct)elisa試劑盒說(shuō)明書》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、人降鈣素原(PCT)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒使用說(shuō)明書廈門慧嘉生物科技有限公司本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!預(yù)期應(yīng)用ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中PCT含量。實(shí)驗(yàn)原理用純化的PCT抗體包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的PCT抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的PCT呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（值），計(jì)算樣品

2、濃度。試劑盒組成及試劑配制1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）2、標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為2,000pg/ml，將其稀釋為1,000pg/ml后，再做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成1,000pg/ml，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.2pg/ml，15.6pg/ml，樣品稀釋液直接作為空白孔0pg/ml。如配制500pg/

3、ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml（不要少于0.5ml）1,000pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。3、樣品稀釋液：1×20ml。4、檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。5、檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。6、檢測(cè)溶液A：1×120/瓶（1:100）。臨用前以檢測(cè)稀釋液A1:100稀釋（如：10檢測(cè)溶液A/990檢測(cè)稀釋液A），充分混勻，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（100/孔），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。7、檢測(cè)溶液B：1×1

4、20/瓶（1:100）。臨用前以檢測(cè)稀釋液B1:100稀釋。稀釋方法同檢測(cè)溶液A。8、底物溶液：1×10ml/瓶。9、濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。10、終止液：1×10ml/瓶（2mol/LH2SO4）。11、覆膜：5張12、使用說(shuō)明書：1份自備物品1、酶標(biāo)儀（建議儀器使用前提前預(yù)熱）2、微量加液器及吸頭，EP管3、蒸餾水或去離子水，濾紙標(biāo)本的采集及保存1、血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4過(guò)夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20或-80保存，但

5、應(yīng)避免反復(fù)凍融。2、血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于1000g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20或-80保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3、其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20或-80保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注：以上標(biāo)本均應(yīng)密封保存，4保存應(yīng)小于1周，-20不應(yīng)超過(guò)1個(gè)月，-80不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月；標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。操作步驟實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37溶解；試劑或樣品配制時(shí)，

6、均需充分混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。1、加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100，注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37溫育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液100（臨用前配制），酶標(biāo)板加上

7、覆膜，37溫育1小時(shí)。3、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。4、每孔加檢測(cè)溶液B工作液（臨用前配制）100，加上覆膜，37溫育1小時(shí)。5、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。6、每孔加底物溶液90，酶標(biāo)板加上覆膜37避光顯色（反應(yīng)時(shí)間控制在15-30分鐘，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯時(shí)，即可終止）。7、每孔加終止溶液50，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。8、立

8、即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度（值）。注：1、試劑準(zhǔn)備：所有試劑在使用前應(yīng)平衡至室溫，使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書要求保存試劑。實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。2、加樣：加樣或加試劑時(shí)，第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育”時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間（包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品）最好控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。3、溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時(shí)將加上蓋或