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1、常用液相色譜柱原理及使用與維護(hù)保養(yǎng)主要內(nèi)容1、液相色譜柱基本理論知識(shí)2、常用液相色譜柱使用方法與維護(hù)保養(yǎng)3、液相色譜柱常見問(wèn)題分析與解決方案1.2液相色譜柱的結(jié)構(gòu)及其主要功能液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲（封頭）與柱填料等組成。柱管：多用不銹鋼制成，若果使用時(shí)柱壓不高于70kg/cm2時(shí)，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填。壓帽：即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽，中部有小孔，多為聚四氟乙烯制成，用于固定篩板。密封環(huán)：位于接頭螺旋環(huán)內(nèi)壁的彈性環(huán)，多為聚四氟乙烯制成，用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。石墨化碳填料
2、柱能分離多種化合物，主要用于分離幾何異構(gòu)體；氧化鋁柱剛性強(qiáng)，柱床穩(wěn)定，可分離多種化合物且多用于制備色譜；氧化鋯柱較氧化鋁柱有更強(qiáng)的pH適用范圍及能耐受更高的溫度，但其應(yīng)用尚待進(jìn)一步研究。1.3.4建立色譜柱檔案應(yīng)同色譜儀器檔案一樣重視色譜柱檔案，主要內(nèi)容包括：品牌、型號(hào)、系列號(hào)、購(gòu)進(jìn)日期、購(gòu)進(jìn)發(fā)票、使用記錄（使用日期、使用人、使用目的、使用情況）、維護(hù)保養(yǎng)記錄（老化時(shí)間、老化人、故障現(xiàn)象、故障原因、處理方法、處理結(jié)果及附圖）等，并以檔案盒形式保存，最好做到專柱專用。1.3.5常用液相色譜柱主要應(yīng)用范圍與特點(diǎn)匯總1.3.5.1反相色譜柱柱填料類型主要應(yīng)用范圍特點(diǎn)C18（ODS）可分離多
3、種化合物，最適合用于極性樣品或做離子抑制的樣品的分析普適性好；保留性強(qiáng)，用途廣；可用于正相。C8（辛基）與C18相似與C18相似，但保留值稍小C3，C4多用于肽類與蛋白質(zhì)保留值更小C1[三甲基單氯硅烷(TMS)]普通反相溶劑分析疏水性強(qiáng)的化合物；使用高水含量溶劑分析高極性化合物；分離多功能團(tuán)化合物保留值最小；最不穩(wěn)定；可用于反相與正相苯基，苯乙基多用于分離分析同時(shí)含極性和非極性芳香化合物的混合物保留值適中；選擇性有所不同，對(duì)極性芳香化合物選擇性更強(qiáng)；可用于正相。1.3.5.2正相色譜柱柱填料類型主要應(yīng)用范圍特點(diǎn)CN（氰基）適用于在ODS上無(wú)保留或分離時(shí)間太長(zhǎng)的組分的分離，以及樣品中同
4、時(shí)含有親水與疏水性化合物而在ODS上色譜優(yōu)化困難的場(chǎng)合，也可用于氨基酸分析。屬中等級(jí)性柱，普適性好；保留適中，可用于正相與反相。NH2（氨基）主要用于分析單糖類、烴類化合物保留性弱；極性大，不穩(wěn)定，酸性條件下易水解；亦可用于反相。OH（二醇基，DIOL）多用于有機(jī)酸、肽類與蛋白質(zhì)分析極性大于CN，小于NH2，常做HILIC用。可反相用。高純硅膠柱多用于制備LC，適用于多種化合物普適性好；價(jià)廉；操作不太方便；pH窄（2-7.5）；次級(jí)保留效應(yīng)強(qiáng)（硅羥基），易峰拖尾或前延，分叉等。1.3.5.3聚合物基質(zhì)柱（eg.聚苯乙烯柱）單獨(dú)的聚苯乙烯類填料柱主要用于分離蛋白質(zhì)類等大分子化合物，多用
5、于GPC、GFC、MEC等；若與離子交換基團(tuán)共鍵則形成離子交換柱，用于分離酸性化合物（磺酸基團(tuán)）、堿性合物（季銨基團(tuán)）及藥物代謝產(chǎn)物等。特點(diǎn)：在1＜PH＜13的流動(dòng)相中穩(wěn)定；分離峰形較好，柱子壽命較長(zhǎng)。1.3.5.4其他無(wú)機(jī)物填料柱如氧化鋁、石墨化碳、氧化鋯、硅藻土等，主要作制備色譜用。柱填料類型主要應(yīng)用范圍特點(diǎn)Chiral（手性柱）常用于分離手性異構(gòu)體，根據(jù)分離不同機(jī)理選擇。不同化學(xué)性質(zhì)的異構(gòu)體需采用不同類型的手性柱。部分亦可用于反相。HILIC（親水作用柱）最常用Diol柱、丙基酰胺基鍵合硅膠柱，多用于分析極性化合物、端基異構(gòu)體、如藥物極性代謝產(chǎn)物、多肽、有機(jī)酸、糖類等。多用于E
6、LSD檢測(cè)，C18無(wú)保留化合物，毒品檢查等?？捎糜诜聪?。1.4液相色譜柱制備工藝簡(jiǎn)述不同品牌色譜柱制備工藝各異，但都可歸納為如下流程（以硅膠柱為例）：硅烷化硅膠制備（四乙氧基硅烷脫乙基與聚合）→Si-OH基暴露（脫乙基，置換成H）→海綿狀多孔硅膠構(gòu)造（物理勻質(zhì)過(guò)程）→官能團(tuán)鍵合（各種官能團(tuán)與Si-OH鍵合）→端基封口（對(duì)殘余的Si-OH用小分子的氯-甲基、氯-乙基鍵合）→潤(rùn)濕混合（加乙醇等調(diào)勻，其配方各廠家均有專利保護(hù)）→裝填（機(jī)械裝填或手工裝填，層層裝填，壓緊，潤(rùn)濕）→高壓平衡（軸向加壓或徑向加壓，各廠家均有專利保護(hù)）→干燥（此步為關(guān)鍵工藝步驟，各廠家均有專利保護(hù)）→削平→組件安裝
7、→預(yù)平衡→柱效測(cè)試流動(dòng)相平衡→柱效測(cè)試→封口→包裝1.5液相色譜柱分離機(jī)理概述色譜柱類型分離機(jī)理備注常規(guī)反相柱相似相溶常規(guī)正相柱相似相溶離子交換柱樣品離子與色譜柱離子達(dá)到置換動(dòng)態(tài)平衡要關(guān)注pH條件手性柱（Chiralcolumn）氫鍵作用、偶級(jí)-偶級(jí)作用、π-π作用、靜電作用、疏水作用、空間作用一般，AGP、HSA、BSA等以疏水作用、空間作用為主。親水性色譜柱（HILIC）氫鍵作用、偶極作用和靜電作用等多種次級(jí)效應(yīng)及相似相溶基于NP原理氨基酸分析柱相似相
