煙草根結(jié)線蟲卵寄生真菌的篩選.

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1、煙草根結(jié)線蟲卵寄生真菌的篩選.煙草根結(jié)線蟲卵寄生真菌的篩選.煙草根結(jié)線蟲卵寄生真菌的篩選.煙草根結(jié)線蟲卵寄生真菌的篩選.　　摘要本研究對采自云南省各地州煙草根結(jié)線蟲發(fā)生地域的土壤、病根樣品進行根結(jié)線蟲卵寄生真菌的篩選、測定，從中篩選到了5株對南方根結(jié)線蟲卵寄生效果顯著的菌株，其寄生率達69.5-95.5%。田間小區(qū)試驗表明，生防菌劑在烤煙團棵期前對南方根結(jié)線蟲數(shù)量防效可達35.49-84.29%，其中生防菌FDT-10、HLD-5-8的防治效果與化學(xué)藥劑相當(dāng)。關(guān)鍵詞煙草根結(jié)線蟲卵寄生真菌南方根結(jié)線蟲寄生率根結(jié)線蟲是危

2、害農(nóng)作物的重要病原之一，其在全世界廣泛分布，寄主范圍廣泛，植物受害嚴(yán)重，世界上重要的經(jīng)濟作物每年由根結(jié)線蟲病造成的損失高達數(shù)百億美元[1]。同時它能使真菌和細菌易于侵染植物，是誘發(fā)植物病害的重要原因之一[2]。對于根結(jié)線蟲的防治，自40年代發(fā)現(xiàn)化學(xué)殺線劑后，其在線蟲防治中大顯身手。但化學(xué)殺線劑的高成本、高毒性及高殘留，對環(huán)境污染嚴(yán)重，使用過程中對人、畜也不安全，因此許多化學(xué)殺線劑已被禁用；輪作和抗性品種等的應(yīng)用對根結(jié)線蟲的防治有一定的作用，但有其局限性。因此人們在開發(fā)一些高效、低毒、低殘留、高選擇性的殺線劑的同時，生

3、物防治線蟲病害日益受到重視。根結(jié)線蟲在土壤中受許多生物影響，尤其是線蟲寄生真菌被認為是自然條件下控制線蟲的主要因子之一。近年來，我國學(xué)者對根結(jié)線蟲的致病性、分布、病原特征、發(fā)生規(guī)律和防治等做了大量的研究1。國外學(xué)者曾有報道粉紅粘帚霉菌和哈次木霉及綠色木霉對線蟲具有生防活性[3-5]，且世界上許多國家利用淡紫擬青霉防治根結(jié)線蟲孢囊等多種線蟲獲得成功[6]。目前已報道的根結(jié)線蟲寄生真菌30多種，研究最多的是Paecilomyceslilacinus和Verticilliumchlamydosporium。寄生真菌對根結(jié)線

4、蟲的寄生率或致病力測定是生物防治的基礎(chǔ)工作。但目前國內(nèi)僅少數(shù)人對根結(jié)線蟲的寄生率或致病力作過測定[7,8]。GodoyGR等研究14種真菌對胞囊線蟲和花生根結(jié)線蟲的寄生性。本課題組從1998年開始，從云南省各地植煙區(qū)采集分離了大量的根結(jié)線蟲生防菌株，進行了煙草根結(jié)線蟲生物防治途徑的探索研究。本文主要報道室內(nèi)根結(jié)線蟲卵寄生真菌的篩選結(jié)果及部分菌株的田間小區(qū)試驗結(jié)果。1材料與方法1.1分離出根結(jié)線蟲二齡幼蟲，挑取活動緩慢或死亡幼蟲經(jīng)滅菌水漂洗后，于PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)一周后觀察生長的菌落，分離進行純培養(yǎng)。1.2從病根

5、樣品中挑取根結(jié)線蟲雌蟲，選取褐色雌蟲用0.1%NaClO進行表面消毒，滅菌水反復(fù)沖洗，于2%水瓊脂平板上25℃培養(yǎng)，培養(yǎng)一周后觀察生長的菌落，分離進行純培養(yǎng)。1.3將從樣品中分離到的線蟲卵分散在2%水瓊脂平板上，24-48小時后觀察，將有真菌定殖現(xiàn)象的卵轉(zhuǎn)移到PDA營養(yǎng)培養(yǎng)基上，25℃暗培養(yǎng)，待真菌長出，鑒定保存。1.4平板分離：分離采用drechsler法。1.5菌株有效性測定：1.5.1將菌株于PDA平板上涂布培養(yǎng)6天，待菌株充分生長產(chǎn)孢后用滅菌水沖洗制備成相同數(shù)量級的孢子液備用。1.5.2于溫室盆栽番茄根系挑取

6、發(fā)育基本一致的根結(jié)線蟲卵塊，于100篩目的篩子上用流水緩緩沖洗，后置于500ml三角瓶內(nèi)加1.5%NaClO200ml劇烈震蕩3-4min，將卵塊充分震蕩分離，自來水充分沖洗，用200、500目篩進行收集，于500目篩上即可收集到純凈的卵，無菌水多次沖洗，稀釋計數(shù)備用。1.5.3充分搖勻孢子液和線蟲卵液，吸取2ml孢子液和0.5ml線蟲卵液于一滅菌試管中，以2ml滅菌水加0.5ml線蟲卵液為空白對照，每處理六次重復(fù)，于6天后觀察線蟲卵孵化情況以及用Axiovert135倒置顯微鏡鏡檢各處理菌株對線蟲卵的寄生情況。1.

7、5.4將各處理被寄生的線蟲卵挑出，用滅菌水在500篩目篩網(wǎng)上充分沖洗收集，接種于PDA培養(yǎng)基上進行再分離，比較再分離獲得的菌株與接種菌株是否為同一菌株。1.6優(yōu)良菌株的田間小區(qū)試驗：1.6.1試驗安排：試驗地選擇根結(jié)線蟲常年發(fā)生較重的植煙地塊。處理為A、B、C、D、E、克百威、空白對照。田間隨機區(qū)組設(shè)計，每處理煙株為30株，三次重復(fù)。于煙苗移栽前將藥劑塘施。1.6.2試驗地土壤根結(jié)線蟲數(shù)量變化調(diào)查：煙苗移栽時、煙株團棵期、采收結(jié)束分別取土樣，漏斗分離法分離調(diào)查根結(jié)線蟲數(shù)量變化。2結(jié)果與分析2.1室內(nèi)篩選結(jié)果分析通過采

8、用多種實驗方法，本研究從云南主要煙區(qū)采集的458份樣品中初步分離得到菌株432株，主要分屬Paecilomyces擬青霉屬、Penicillium青霉屬、Fusarium鐮孢菌屬、Mucor毛霉菌屬、Phoma柱孢、Verticillium輪枝菌屬、Trichoderma木霉菌屬、Greenmuscardine綠僵菌屬。分離鑒定的各種屬真菌比例