煙草根結(jié)線蟲卵寄生真菌的篩選.

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1、煙草根結(jié)線蟲卵寄生真菌的篩選.煙草根結(jié)線蟲卵寄生真菌的篩選.煙草根結(jié)線蟲卵寄生真菌的篩選.煙草根結(jié)線蟲卵寄生真菌的篩選.　　摘要本研究對(duì)采自云南省各地州煙草根結(jié)線蟲發(fā)生地域的土壤、病根樣品進(jìn)行根結(jié)線蟲卵寄生真菌的篩選、測(cè)定，從中篩選到了5株對(duì)南方根結(jié)線蟲卵寄生效果顯著的菌株，其寄生率達(dá)69.5-95.5%。田間小區(qū)試驗(yàn)表明，生防菌劑在烤煙團(tuán)棵期前對(duì)南方根結(jié)線蟲數(shù)量防效可達(dá)35.49-84.29%，其中生防菌FDT-10、HLD-5-8的防治效果與化學(xué)藥劑相當(dāng)。關(guān)鍵詞煙草根結(jié)線蟲卵寄生真菌南方根結(jié)線蟲寄生率根結(jié)線蟲是危

2、害農(nóng)作物的重要病原之一，其在全世界廣泛分布，寄主范圍廣泛，植物受害嚴(yán)重，世界上重要的經(jīng)濟(jì)作物每年由根結(jié)線蟲病造成的損失高達(dá)數(shù)百億美元[1]。同時(shí)它能使真菌和細(xì)菌易于侵染植物，是誘發(fā)植物病害的重要原因之一[2]。對(duì)于根結(jié)線蟲的防治，自40年代發(fā)現(xiàn)化學(xué)殺線劑后，其在線蟲防治中大顯身手。但化學(xué)殺線劑的高成本、高毒性及高殘留，對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重，使用過程中對(duì)人、畜也不安全，因此許多化學(xué)殺線劑已被禁用；輪作和抗性品種等的應(yīng)用對(duì)根結(jié)線蟲的防治有一定的作用，但有其局限性。因此人們?cè)陂_發(fā)一些高效、低毒、低殘留、高選擇性的殺線劑的同時(shí)，生

3、物防治線蟲病害日益受到重視。根結(jié)線蟲在土壤中受許多生物影響，尤其是線蟲寄生真菌被認(rèn)為是自然條件下控制線蟲的主要因子之一。近年來，我國學(xué)者對(duì)根結(jié)線蟲的致病性、分布、病原特征、發(fā)生規(guī)律和防治等做了大量的研究1。國外學(xué)者曾有報(bào)道粉紅粘帚霉菌和哈次木霉及綠色木霉對(duì)線蟲具有生防活性[3-5]，且世界上許多國家利用淡紫擬青霉防治根結(jié)線蟲孢囊等多種線蟲獲得成功[6]。目前已報(bào)道的根結(jié)線蟲寄生真菌30多種，研究最多的是Paecilomyceslilacinus和Verticilliumchlamydosporium。寄生真菌對(duì)根結(jié)線

4、蟲的寄生率或致病力測(cè)定是生物防治的基礎(chǔ)工作。但目前國內(nèi)僅少數(shù)人對(duì)根結(jié)線蟲的寄生率或致病力作過測(cè)定[7,8]。GodoyGR等研究14種真菌對(duì)胞囊線蟲和花生根結(jié)線蟲的寄生性。本課題組從1998年開始，從云南省各地植煙區(qū)采集分離了大量的根結(jié)線蟲生防菌株，進(jìn)行了煙草根結(jié)線蟲生物防治途徑的探索研究。本文主要報(bào)道室內(nèi)根結(jié)線蟲卵寄生真菌的篩選結(jié)果及部分菌株的田間小區(qū)試驗(yàn)結(jié)果。1材料與方法1.1分離出根結(jié)線蟲二齡幼蟲，挑取活動(dòng)緩慢或死亡幼蟲經(jīng)滅菌水漂洗后，于PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)一周后觀察生長(zhǎng)的菌落，分離進(jìn)行純培養(yǎng)。1.2從病根

5、樣品中挑取根結(jié)線蟲雌蟲，選取褐色雌蟲用0.1%NaClO進(jìn)行表面消毒，滅菌水反復(fù)沖洗，于2%水瓊脂平板上25℃培養(yǎng)，培養(yǎng)一周后觀察生長(zhǎng)的菌落，分離進(jìn)行純培養(yǎng)。1.3將從樣品中分離到的線蟲卵分散在2%水瓊脂平板上，24-48小時(shí)后觀察，將有真菌定殖現(xiàn)象的卵轉(zhuǎn)移到PDA營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上，25℃暗培養(yǎng)，待真菌長(zhǎng)出，鑒定保存。1.4平板分離：分離采用drechsler法。1.5菌株有效性測(cè)定：1.5.1將菌株于PDA平板上涂布培養(yǎng)6天，待菌株充分生長(zhǎng)產(chǎn)孢后用滅菌水沖洗制備成相同數(shù)量級(jí)的孢子液備用。1.5.2于溫室盆栽番茄根系挑取

6、發(fā)育基本一致的根結(jié)線蟲卵塊，于100篩目的篩子上用流水緩緩沖洗，后置于500ml三角瓶?jī)?nèi)加1.5%NaClO200ml劇烈震蕩3-4min，將卵塊充分震蕩分離，自來水充分沖洗，用200、500目篩進(jìn)行收集，于500目篩上即可收集到純凈的卵，無菌水多次沖洗，稀釋計(jì)數(shù)備用。1.5.3充分搖勻孢子液和線蟲卵液，吸取2ml孢子液和0.5ml線蟲卵液于一滅菌試管中，以2ml滅菌水加0.5ml線蟲卵液為空白對(duì)照，每處理六次重復(fù)，于6天后觀察線蟲卵孵化情況以及用Axiovert135倒置顯微鏡鏡檢各處理菌株對(duì)線蟲卵的寄生情況。1.

7、5.4將各處理被寄生的線蟲卵挑出，用滅菌水在500篩目篩網(wǎng)上充分沖洗收集，接種于PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行再分離，比較再分離獲得的菌株與接種菌株是否為同一菌株。1.6優(yōu)良菌株的田間小區(qū)試驗(yàn)：1.6.1試驗(yàn)安排：試驗(yàn)地選擇根結(jié)線蟲常年發(fā)生較重的植煙地塊。處理為A、B、C、D、E、克百威、空白對(duì)照。田間隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，每處理煙株為30株，三次重復(fù)。于煙苗移栽前將藥劑塘施。1.6.2試驗(yàn)地土壤根結(jié)線蟲數(shù)量變化調(diào)查：煙苗移栽時(shí)、煙株團(tuán)棵期、采收結(jié)束分別取土樣，漏斗分離法分離調(diào)查根結(jié)線蟲數(shù)量變化。2結(jié)果與分析2.1室內(nèi)篩選結(jié)果分析通過采

8、用多種實(shí)驗(yàn)方法，本研究從云南主要煙區(qū)采集的458份樣品中初步分離得到菌株432株，主要分屬Paecilomyces擬青霉屬、Penicillium青霉屬、Fusarium鐮孢菌屬、Mucor毛霉菌屬、Phoma柱孢、Verticillium輪枝菌屬、Trichoderma木霉菌屬、Greenmuscardine綠僵菌屬。分離鑒定的各種屬真菌比例