化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用ppt課件

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1、內(nèi)容提要免疫檢測(cè)技術(shù)概述化學(xué)發(fā)光免疫診斷技術(shù)簡(jiǎn)述化學(xué)發(fā)光診斷技術(shù)在臨床中的應(yīng)用第一部分免疫檢測(cè)技術(shù)概述定義免疫學(xué)檢測(cè)主要是利用抗原和抗體的特異性反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)的一種手段。它可以利用同位素(熒光素)酶、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等對(duì)檢測(cè)信號(hào)進(jìn)行放大和顯示。夾心法競(jìng)爭(zhēng)法間接法免疫檢測(cè)常用方法放射免疫診斷技術(shù)(RIA)酶聯(lián)免疫診斷技術(shù)(ELISA)化學(xué)發(fā)光免疫診斷技術(shù)(CLIA)20世紀(jì)60年代70年代80年代90年代2000年2020年時(shí)間臨床免疫診斷技術(shù)的發(fā)展基本歷經(jīng)了以下三個(gè)階段:化學(xué)發(fā)光(CLIA)酶免(EIA)放免(RIA)靈敏度(M/L)10-17-10-1910-1510

2、-15-10-16標(biāo)記物酶蛋白或發(fā)光物質(zhì)酶蛋白放射性元素靈敏度高低高線性范圍寬窄寬放射污染無(wú)無(wú)有試劑穩(wěn)定性12個(gè)月6-12個(gè)月1-3個(gè)月操作易易繁瑣1.興起于20世紀(jì)80年代,現(xiàn)已被臨床普遍使用,成為臨床免疫診斷的支柱方法;2.產(chǎn)品處于成熟期。1.導(dǎo)入于20世紀(jì)90年代,現(xiàn)較大醫(yī)院開(kāi)展個(gè)別項(xiàng)目;2.產(chǎn)品處于導(dǎo)入期或成長(zhǎng)期?;瘜W(xué)發(fā)光1.興起于20世紀(jì)70年代,現(xiàn)仍在臨床應(yīng)用;2.產(chǎn)品處于衰退期。1.興起于20世紀(jì)80年代,現(xiàn)普遍使用,為我國(guó)臨床免疫診斷的基本方法;2.產(chǎn)品處于成熟期。酶聯(lián)免疫1.興起于20世紀(jì)60年代,現(xiàn)已基本退出臨床應(yīng)用;2.產(chǎn)品生命周期已終結(jié);3

3、.廠商試劑和儀器共同開(kāi)發(fā)。1.興起于20世紀(jì)70年代,現(xiàn)仍普遍使用于縣級(jí)以上醫(yī)院;2.產(chǎn)品處于衰退期;3.廠商試劑與儀器共同開(kāi)發(fā)。放射免疫歐美中國(guó)免疫診斷現(xiàn)狀當(dāng)前進(jìn)展國(guó)際:國(guó)際上排名前六位的診斷巨頭企業(yè)均投入了大量的資金和人力進(jìn)行化學(xué)發(fā)光技術(shù)的研發(fā)和產(chǎn)業(yè)化國(guó)內(nèi):只有一兩家科研機(jī)構(gòu)及企業(yè)在進(jìn)行相關(guān)問(wèn)題的比較深入研究,但發(fā)展較快中國(guó)免疫診斷現(xiàn)狀中國(guó)臨床免疫定量診斷現(xiàn)狀亟待改善化學(xué)發(fā)光免疫診斷技術(shù)已成為免疫定量診斷的主流昂貴的成本價(jià)格嚴(yán)重阻礙化學(xué)發(fā)光免疫診斷技術(shù)造福中國(guó)人民臨床呼喚符合國(guó)情的解決方案中國(guó)即將迎來(lái)免疫定量診斷技術(shù)普及的新高潮第二部分化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)化學(xué)

4、發(fā)光技術(shù)概述化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù),是將化學(xué)發(fā)光體系與免疫反應(yīng)相結(jié)合,用于檢測(cè)微量抗原或抗體的一種新型標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)。其特點(diǎn)在于靈敏度高、測(cè)定范圍寬、快速、簡(jiǎn)便,并且在測(cè)試中不使用有害的試劑,無(wú)污染。類(lèi)型化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析電化學(xué)發(fā)光分析時(shí)間分辨免疫熒光分析四種檢測(cè)方法比較技術(shù)類(lèi)型標(biāo)記、反應(yīng)體系主要優(yōu)點(diǎn)主要不足化學(xué)發(fā)光吖啶酯過(guò)氧化氫靈敏度較高試劑成本高,發(fā)光時(shí)間短,測(cè)量方式復(fù)雜(積分法),需原位進(jìn)樣(InSituInjector)儀器成本及維護(hù)費(fèi)用較高化學(xué)發(fā)光酶免疫分析辣根酶魯米諾堿性磷酸酶AMPPD測(cè)量方式簡(jiǎn)單、成本較低、靈敏度較高不同次試驗(yàn)中,曲

5、線有漂移時(shí)間分辨熒光銪(Eu)、鏑(Dy)、釤(Sm)、鋱(Tb)等絡(luò)合物脈沖光源激發(fā)靈敏度較高、試劑較穩(wěn)定試劑成本較高 測(cè)量方式復(fù)雜(脈沖激發(fā)、流動(dòng)池) 儀器成本及維護(hù)費(fèi)用高 環(huán)境及樣品中同類(lèi)元素可導(dǎo)致本底干擾電化學(xué)發(fā)光釕(Ru)的絡(luò)合物靈敏度較高、試劑較穩(wěn)定化學(xué)發(fā)光酶免疫分析用參與某一發(fā)光反應(yīng)的酶來(lái)標(biāo)記抗原或抗體,免疫反應(yīng)后,加入發(fā)光試劑,測(cè)定發(fā)光體系的發(fā)光強(qiáng)度來(lái)確定抗原或抗體的含量。兩大體系辣根過(guò)氧化物酶(HRP)體系堿性磷酸酶(AP)體系堿磷酶發(fā)光信號(hào)示意圖Time?Signal?辣根酶發(fā)光信號(hào)示意圖兩大體系的比較堿磷酶體系:水解反應(yīng),起光較慢,發(fā)光強(qiáng)度較

6、弱,靈敏度較高。辣根酶體系:氧化還原反應(yīng),起光較快,發(fā)光強(qiáng)度較大。第三部分化學(xué)發(fā)光診斷技術(shù)在臨床中的應(yīng)用化學(xué)發(fā)光在臨床檢測(cè)中的 主要應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)甲狀腺功能檢測(cè)生殖內(nèi)分泌激素系列糖尿病檢測(cè)傳染病檢測(cè)系列肝纖維化系列一、腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)1、腫瘤標(biāo)志物(tumormarker,TM)是指由腫瘤組織產(chǎn)生的存在于腫瘤組織本身,或分泌至血液或其他體液,或是因腫瘤組織刺激,由宿主細(xì)胞產(chǎn)生的反映腫瘤的存在和生長(zhǎng),含量明顯高于正常參考值的一類(lèi)物質(zhì)。通過(guò)對(duì)這類(lèi)物質(zhì)的分析,能幫助人們從正常組織中區(qū)別腫瘤或測(cè)定腫瘤細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)以及對(duì)細(xì)胞膜上的特性進(jìn)行分析,以此作為辨認(rèn)腫瘤細(xì)胞的標(biāo)

7、志。2、腫瘤標(biāo)志物的分類(lèi)(1)、腫瘤胚胎性抗原標(biāo)志物該類(lèi)蛋白質(zhì)即前文所提到的因返祖現(xiàn)象的出現(xiàn),而產(chǎn)生的腫瘤標(biāo)志物。雖然該類(lèi)標(biāo)志物與腫瘤組織不一定具有特定的相關(guān)性,但與腫瘤的發(fā)生存在著內(nèi)在的聯(lián)系。例:甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)(2)、糖類(lèi)抗原標(biāo)志物該類(lèi)物質(zhì)是腫瘤細(xì)胞表面的抗原物質(zhì),或腫瘤細(xì)胞所分泌的物質(zhì)。這類(lèi)標(biāo)志物的出現(xiàn)為臨床腫瘤的診斷帶來(lái)方便,但其命名無(wú)規(guī)律可言。有些是腫瘤細(xì)胞株編號(hào),有些是抗體物質(zhì)的編號(hào)。該類(lèi)標(biāo)志物又可分為兩類(lèi)①糖類(lèi)高分子粘蛋白抗原例:癌抗原CA125癌

8、抗原CA1

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