響應(yīng)面法優(yōu)化微波提取柚皮總黃酮工藝論文.doc

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1、響應(yīng)面法優(yōu)化微波提取柚皮總黃酮工藝論文1實驗材料與方法1.1實驗材料：蜜柚，九成熟（市售）、蘆?。ㄖ袊幤飞镏破窓z定所提供）；無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉均為優(yōu)級純；二次蒸餾水1.2主要儀器設(shè)備：FA2004型電子天平（上海精科）；722-1型電熱恒溫干燥箱（湖北省黃石市醫(yī)療器械廠）；HK-04A200g手提式粉碎機(jī)（廣州旭朗機(jī)械設(shè)備）；WD900ASL23-2型微波爐（格蘭仕）；SHZ-III循環(huán)水多用真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；722型可見分光光度計1.3實驗方法1.3.1實驗材料的預(yù)處理柚皮→洗凈→切片→50℃干燥→冷卻→粉碎過40目篩→制得

2、柚皮粉。1.3.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程精確稱取蘆丁對照品0.01g用80%乙醇溶解，定容于100ml容量瓶中，配制成0.1g/L的蘆丁對照品溶液。準(zhǔn)確移取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml的蘆丁對照品溶液于10ml容量瓶中，用乙醇補充至3.0，加入5%亞硝酸鈉溶液0.5ml，搖勻后放置6min，然后加入10%硝酸鋁溶液0.5ml，搖勻后放置6min；最后加入1mol/L氫氧化鈉溶液4ml，用80%乙醇補充至刻度，搖勻后放置15-20min，以相應(yīng)試劑做空白，于510nm處測定吸光度，制作蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸得到吸光度A與黃酮質(zhì)量濃度

3、的方程：A=12.136c—0.0045，相關(guān)系數(shù)R=0.9980.1.3.4微波法提取總黃酮的方法稱取1.00g柚皮粉于錐形瓶中，加入80%乙醇溶液35mL，在解凍檔下微波處理6min(每次加熱2min，放置1min，累計達(dá)6min)，過濾，定容至10011mL。采用硝酸鋁比色法，在510nm處測定吸光度，計算總黃酮得率。1.3.5總黃酮類物質(zhì)的測定按以上方法用提取液代替蘆丁實驗，利用回歸方程進(jìn)行計算即可?！　=m1V2D／m×100%式中X———樣品中總黃酮含量，mg／mL；　　　m1———根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出待測液中黃酮的量，mg；　　　m———樣品質(zhì)量

4、，g；　　　D———樣品的總稀釋倍數(shù)；V2———樣品提取液總體積，mL。2結(jié)果與討論2.1微波法提取總黃酮工藝條件單因素試驗設(shè)計2.1.1乙醇濃度對總黃酮提取效果影響稱取5份1.00g柚皮粉分別置于錐形瓶中，在料液比固定在1:35、提取時間為5min，解凍檔的條件下，分別對柚皮粉按以下不同乙醇濃度50%、60%、70%、80%、90%進(jìn)行微波提取，布氏抽濾，濾渣以同樣的條件提取、抽濾，合并濾液，然后用相應(yīng)濃度的乙醇水溶液定容至50mL，按照制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法得出柚皮中總黃酮的提取率，結(jié)果見圖1。圖1乙醇濃度對總黃酮提取率的影響由圖1可知，隨著乙醇濃度的增加，總

5、黃酮的提取率也在升高，在乙醇濃度為80%時達(dá)到最大值，但當(dāng)乙醇濃度繼續(xù)增大時，提取率下降，因此乙醇濃度11為80%左右為宜。2.1.2料液比對總黃酮提取效果的影響稱取5份1.00g柚皮粉分別置于錐形瓶中,在乙醇濃度固定在80%、提取時間為5min，解凍檔的條件下，分別對柚皮粉按以下不同料液比1:20、1:25、1:30、1:35、1:40進(jìn)行微波提取，方法同上，得出總黃酮提取率，結(jié)果見圖2。圖2料液比對總黃酮提取率的影響由圖2可以看出，在液料比為1:20到1:35增加的過程中，總黃酮的得率隨液料比的增大升高，液料比1:35是達(dá)到最大，隨后提取率下降，因此選取1

6、:35較為合適。2.1.3提取時間對總黃酮提取效果的影響稱取5份1.00g柚皮粉分別置于錐形瓶中,在乙醇濃度固定在80%、料液比為1:35的條件下，分別對柚皮粉按以下不同提取時間3、4、5、6、7min進(jìn)行微波提取，方法同上，得出總黃酮提取率，結(jié)果見圖3。圖3提取時間對總黃酮提取率的影響11由圖3可以看出,開始時總黃酮得率隨提取時間的延長而升高,當(dāng)提取時間達(dá)到6min時，總黃酮得率達(dá)到最高，之后隨時間繼續(xù)延長，總黃酮得率不再提高反而略有下降，因此選擇提取時間為6min為宜。2.2中心實驗設(shè)計與響應(yīng)面分析采用軟件Design-Expert8.0中的Box-Beh

7、nken試驗設(shè)計原理[14]，在乙醇濃度、料液比、提取時間3個因素對柚皮總黃酮提取率的研究的基礎(chǔ)上，綜合單因素試驗結(jié)果，采用響應(yīng)面分析法在3因素3水平上，以乙醇濃度、料液比、提取時間3個因素為自變量，柚皮總黃酮提取率為響應(yīng)值進(jìn)行優(yōu)化，以達(dá)到最大限度提取柚皮總黃酮的目的。試驗因素與水平設(shè)計表見表1，響應(yīng)面試驗方案及結(jié)果見表2。表1Box-behnken實驗設(shè)計因素與水平水平因素乙醇濃度%(A)料液比(g:mL)(B)提取時間min(C)-1701:3050801:3561901:407表2Box-Behnken中心組合設(shè)計方案及實驗結(jié)果實驗號A:乙醇濃度%B:料

8、液比C:提取時間minY:總黃酮得率%