丙泊酚瑞芬太尼對(duì)大鼠缺血再灌注損傷肺泡細(xì)胞凋亡的影響

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1、丙泊酚瑞芬太尼對(duì)大鼠缺血再灌注損傷肺泡細(xì)胞凋亡的影響：郭曉軍曹定睿*郭晶宇楊春艷張文頡【摘要】　　目的：探討麻醉藥丙泊酚(propofol)和瑞芬太尼(remifentanil)對(duì)大鼠缺血再灌注損傷(ischemiareperfusioninjury,IR)后肺泡細(xì)胞凋亡的影響。方法：建立大鼠原位熱缺血再灌注模型，于結(jié)扎前、缺血30min、再灌注1h、2h、4h給予藥物干預(yù)，采取肺組織及右房血標(biāo)本,測(cè)定血氧分壓，肺組織濕/干重比,并作光鏡和透射電鏡觀察組織細(xì)胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu),確定凋亡發(fā)生，流式細(xì)胞儀測(cè)定肺組織

2、中凋亡情況。結(jié)果：缺血再灌注組與假手術(shù)組比較，血氧分壓降低，肺組織濕/干重比增高，肺泡細(xì)胞凋亡指數(shù)增高，丙泊酚組、瑞芬太尼組與缺血再灌注組比較，血氧分壓增高，肺組織濕/干重比降低，肺泡細(xì)胞凋亡指數(shù)下降。結(jié)論：丙泊酚和瑞芬太尼對(duì)IR后肺泡細(xì)胞凋亡有抑制作用?！娟P(guān)鍵詞】丙泊酚瑞芬太尼IR肺泡細(xì)胞凋亡　　AbstractObjective:Theexperimentifentanilagainsttheapoptosisofalveolarcellsinducedbyischemiareperfusioninjur

3、y.Methods:Aftertheestablishmentoftheischemiareperfusioninsitumodels,allratsaceuticalintervention.Beforetheligation,after30minoftheischemiaandafter1h,2h,4hrepectivelyofthereperfusion,plesoftherightatrium,thendetectthepartialpressureofbloodoxygen,thethattheap

4、optosishappensanddetectapoptosisofalveolarcellseter.Results:paredegroup，Ischemia-reperfusiongroupshoia-reperfusiongroup，propofoltreatmentgroupandremifentaniltreatmentgroupshoifentanilhavesuppressiontotheapoptosisofalveolarcellsinducedbyischemiareperfusionin

5、jury.　　Keyifentanil；IR；Apoptosisofalveolarcells　　肺IR可在多種臨床情況下發(fā)生,是肺移植早期和心肺轉(zhuǎn)流術(shù)后肺功能障礙的重要原因，有報(bào)道在肝臟、心臟、腎臟、神經(jīng)系統(tǒng)、視網(wǎng)膜等多種臟器IR損傷過(guò)程中均出現(xiàn)細(xì)胞凋亡,并對(duì)IR損傷的發(fā)展和該臟器預(yù)后具有重大意義。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于麻醉藥物對(duì)肺IR中肺泡細(xì)胞凋亡的研究較少,為此,我們研究了麻醉藥物丙泊酚和瑞芬太尼對(duì)肺IR中肺泡細(xì)胞凋亡過(guò)程中的影響?！　?材料和方法　　1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與肺缺血再灌注損傷模型的制備　　雄性健康i

6、n、再灌注1h、2h、4h五個(gè)時(shí)點(diǎn)取材待檢?！　』罱Y(jié)阻斷法阻斷右肺靜脈和右主支氣管，使右肺處于萎陷狀態(tài)，同時(shí)將潮氣量減少1/3，熱缺血1h后依次開(kāi)放右肺靜脈、右主支氣管和右肺動(dòng)脈，使右肺充分膨脹?！　?.2實(shí)驗(yàn)方法　　大鼠麻醉誘導(dǎo)用戊巴比妥鈉(30mg/kg)，用戊巴比妥鈉(15mg/kg)追加維持麻醉。氣管插管機(jī)械通氣，建立靜脈通道供輸液用。動(dòng)物缺血30min后丙泊酚組給予5mg/(kg·h)。瑞芬太尼組給予0.5μg/(kg·min)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)即采左心房血測(cè)定血氧分壓,測(cè)定肺組織濕/干重比,并結(jié)合光鏡觀

7、察評(píng)價(jià)肺損傷。通過(guò)電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu),從形態(tài)學(xué)角度確定凋亡發(fā)生。采用流式細(xì)胞儀對(duì)右肺中葉凋亡細(xì)胞進(jìn)行定量檢測(cè),按細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(AnnexinV杭州聯(lián)科公司)說(shuō)明書操作，取右肺中葉組織,置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中,剪碎,置于過(guò)濾離心管(濾過(guò)直徑35μm,BectonDickinson,美國(guó))中,4℃,1000轉(zhuǎn)離心5min,去上清后加入PBS（磷酸鹽緩沖液）,混勻成細(xì)胞懸液。左、右肺組織細(xì)胞凋亡率檢測(cè)使用AnnexinV/PI試劑盒,將細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)調(diào)整成1×106/mL的濃度,用Bindingbuffer液

8、沖洗,4℃,1000轉(zhuǎn)離心5min,去上清后依次加入250μLBindingbuffer、5μLFITCAnnexinV和5μLPI,混勻,冰浴反應(yīng)10min后,上流式細(xì)胞儀(Coulter.elite.esp,美國(guó))檢測(cè)。激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm,FITC發(fā)射波長(zhǎng)為525nm,PI發(fā)射波長(zhǎng)為610nm。正常細(xì)胞FITC及PI均低染(FITC-PI-),凋亡細(xì)胞FITC高染而PI低染(FITC+PI-