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《生姜對(duì)小鼠免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、生姜對(duì)小鼠免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究作者：熊平源馬丙娜郭明雄【關(guān)鍵詞】生姜 摘要:目的:了解生姜對(duì)小鼠免疫功能的影響。方法:①PFC法檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞抗體生成水平;②常規(guī)法檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活性;③3H-TdR攝入法檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞細(xì)胞毒活性;④乳酸脫氫酶（LDH）釋放法檢測(cè)小鼠脾臟NK細(xì)胞殺傷活性。結(jié)果:與空白對(duì)照組比較，在有效劑量范圍內(nèi)，生姜能促進(jìn)脾細(xì)胞抗體的生成，能增加小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活性及細(xì)胞毒活性，能增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷活性。結(jié)論:生姜具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用?！ ￡P(guān)鍵詞:生姜;腹腔巨噬細(xì)胞;免疫功能 姜科植物生姜為臨床
2、常用中藥，民間用生姜治療風(fēng)寒感冒和風(fēng)濕痛等具有良好的解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎等作用。生姜對(duì)機(jī)體免疫機(jī)能等因素是否有影響值得探討。本研究?jī)H就生姜對(duì)小鼠脾細(xì)胞抗體生成水平、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活性、腹腔巨噬細(xì)胞細(xì)胞毒活性、脾臟NK細(xì)胞殺傷活性等功能的影響進(jìn)行了研究?！ ?材料 1.1動(dòng)物Balb/c品系小鼠，體重18～22g，雌雄各半，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供?！ ?.2生姜市售當(dāng)年鮮姜。生姜煎煮液的制備:將生姜洗凈涼干后切成薄片，稱(chēng)重，每100g加蒸餾水500ml，置100ml的燒瓶中，放4℃冰箱中浸泡1h，加熱煮沸，弱火維持40min，雙層紗
3、布過(guò)濾，濾液濃縮至原體積的1/10，即為100/100生姜原液（1g/ml）。濃縮液放4℃冰箱備用（普通冰箱保存4天，室溫保存2天）。 1.3主要試劑Lps為sigma公司產(chǎn)品，重組人TNF為軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物制劑發(fā)展中心產(chǎn)品，L929細(xì)胞株由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部免疫學(xué)系提供?！ ?.4主要儀器CO2培養(yǎng)箱為美國(guó)NapCO.產(chǎn)品，倒置生物顯微鏡為重慶光學(xué)儀器廠(chǎng)產(chǎn)品，DYQ-III型多頭細(xì)胞收集器為紹興醫(yī)療器械廠(chǎng)產(chǎn)品，DG3022型酶聯(lián)免疫測(cè)定儀為華東電子管廠(chǎng)產(chǎn)品，LS-5801型液體閃爍計(jì)數(shù)器為美國(guó)Backman公司產(chǎn)品?！ ?方法與結(jié)果 將
4、小鼠隨機(jī)分成4組，每組10只?？瞻讓?duì)照組:每只每日用1ml生理鹽水，連續(xù)灌胃10d;生姜I組:0.25g/日/公斤體重連續(xù)灌胃10d;生姜II組:0.5g/日/公斤體重連續(xù)灌胃10d;生姜III組:1g/日/公斤體重連續(xù)灌胃10d?！ ?.1生姜對(duì)小鼠脾細(xì)胞抗體形成的影響1］采取PFC檢測(cè)法［1］，于喂藥第6天一次性腹腔注射2.5%SRBC0.4ml免疫小鼠。免疫后第5天常規(guī)取脾，制成2×107/ml單細(xì)胞懸液，于96孔平底板上，每個(gè)樣品設(shè)6個(gè)復(fù)孔，每個(gè)試驗(yàn)孔中加入2×107/ml脾細(xì)胞懸液100μl、0.25%SR-BC50μl、1∶8補(bǔ)
5、體50μl。37℃孵育1h，1000r/min離心10min，取上清置酶標(biāo)儀上測(cè)各孔OD413值。結(jié)果見(jiàn)表1?！ ?.2生姜對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響于喂藥后的第8天，取6%淀粉肉湯1ml腹腔注射小鼠，24h后重復(fù)一次。實(shí)驗(yàn)前腹腔注射3～4mlHank's液4～5ml，1500r/min×10min，棄上清，加入10%小牛血清RPMI1640調(diào)細(xì)胞濃度至2～3×106/ml，加入1×107/ml白色念珠菌懸液1ml，混勻后37℃孵育1h。1000r/min離心5min，棄上清，留少許上清將沉淀吸勻，取一滴置于載玻片上，加0.05%美藍(lán)
6、一滴，加蓋玻片，5min后鏡檢計(jì)數(shù)100個(gè)巨噬細(xì)胞，分別計(jì)算其吞噬百分率和吞噬指數(shù)［2］。結(jié)果見(jiàn)表2。表1生姜對(duì)小鼠脾細(xì)胞抗體形成的影響*注:*與空白對(duì)照組比較。表2生姜對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響注:*與空白對(duì)照組比較，P<0.01。 2.3生姜對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞細(xì)胞毒活性的影響用3H-TdR標(biāo)記的L929細(xì)胞（靶細(xì)胞），將制備好的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞懸液加入96孔培養(yǎng)板中，100μl/孔（濃度為1×106/ml），培養(yǎng)4h，洗出懸浮細(xì)胞，加入10μlLPSj繼續(xù)培養(yǎng)8h，取上清作為T(mén)NF待測(cè)樣品。加入3H-TdR標(biāo)記的L929細(xì)
7、胞100μl（效靶比為5∶1），同時(shí)設(shè)靶細(xì)胞對(duì)照孔注:*與空白對(duì)照組比較。 2.4生姜對(duì)小鼠NK細(xì)胞殺傷活性的影響［4，5］采取乳酸脫氫酶（LDH）釋放法檢測(cè)小鼠脾臟NK細(xì)胞殺傷活性，并按下列公式計(jì)算NK細(xì)胞殺傷活性:NK細(xì)胞殺傷活性（%）=實(shí)驗(yàn)孔OD490值-自然釋放孔OD490值最大釋放孔OD490值-自然釋放孔OD490值×100%結(jié)果見(jiàn)表4。表4生姜對(duì)小鼠NK細(xì)胞殺傷活性的影響注:*與空白對(duì)照組比較?！ ?討論 單核巨噬細(xì)胞是重要的固有免疫的效應(yīng)細(xì)胞，其通過(guò)氧依賴(lài)性殺菌系統(tǒng)和氧非依賴(lài)性殺菌系統(tǒng)識(shí)別、殺傷、清除病原體等抗原性異物;
8、活化的單核巨噬細(xì)胞通過(guò)分泌MIP-1α/β、MCP-1和IL-8等細(xì)胞因子參與和促進(jìn)炎癥反應(yīng)，分泌的TNF-α能誘導(dǎo)腫瘤及病毒感染等靶細(xì)胞凋亡。此外，單核巨噬細(xì)胞還是專(zhuān)職抗原處理
