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1、桑黃提取精制工藝的研究作者：戈延茹，張春燕，姜樹紅【摘要】 目的優(yōu)選桑黃多糖的提取、精制工藝。方法采用正交實驗設(shè)計優(yōu)選桑黃多糖提取工藝。通過吸附法與醇沉法的比較，選出最佳精制工藝。結(jié)果桑黃多糖最佳提取工藝為：粉碎粒度60目，浸泡12h，用14倍的水，提取3h，用殼聚糖吸附法精制多糖。結(jié)論浸泡時間對實驗影響較大，采用殼聚糖吸附法精制，多糖損失少，此提取精制工藝方法可行。【關(guān)鍵詞】桑黃；多糖；正交設(shè)計；提?。痪啤 bstract：ObjectiveTooptimizetheextractionandpurificationmethodofthepolysacch
2、arideofPhellinusigniarius.MethodsThebsetextractmethodofthepolysaccharideinedbyorthogonaldesign.Throughtheparisonoftheethanolextractionandadsorbingpurification,thebestpurificationmethodethodofthepolysaccharideinthePhellinusigniariusesh,theimmersiontimeaterial14:1,andextracted3times.Chi
3、tosanabsorbingpurificationmersiontimegreatlyinfluencedtheextractionofPhellinusigniarius.Chitosanabsorbingpurificationg，置250ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，配成濃度為100.4μg/ml標準葡萄糖溶液備用。 5%苯酚試劑的配制：稱取蒸餾后苯酚7.5g，加水150ml溶解，置棕色瓶內(nèi)放冰箱備用。 標準曲線的繪制：精確量取葡萄糖標準溶液0.1,0.2,0.3,0.5,0.7,0.9ml置干燥試管中分別再加水使其成1.0ml，再分別加入5%苯酚溶
4、液2.0ml，搖勻。然后加濃H2SO47.0ml，充分搖勻，室溫放置25min，在490nm處測定其最大吸光度，同時做一空白。以吸光度對葡萄糖濃度線性回歸，得回歸方程為Y＝0.0634X+0.0104(r＝0.9922，n＝6)。實驗表明，葡萄糖在0.91～9.16μg/ml范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。見圖1?！ D1標準曲線（略） 2.1.2樣品測定樣品經(jīng)處理后(供試品溶液的制備)，移至250ml容量瓶中，定容，搖勻，精確吸取2ml到25ml容量瓶，定容，搖勻成為樣品液。測定時，精確吸取樣品液1ml，按測定標準曲線同樣方法測其吸光度值，按下式計算多糖含量：
5、 多糖含量（%）=CD/l)；D為樣品溶液的稀釋倍數(shù)，W為生藥的重量(μg)?！ ?.2桑黃多糖提取工藝的選擇 2.2.1制定考察因素與水平［5］據(jù) 2.3桑黃多糖精制工藝的選擇［6，7］ 2.3.1藥材的提取取桑黃藥材100g,按最佳提取方案提取，提取液過濾，合并濾液，濃縮至400ml，定容到500ml容量瓶中備用?！ ?.3.2水提液的制備取3份藥材提取液，每份1ml，置250ml容量瓶中，定容即得水提液供試品。用“2.1.2”項條件測定多糖的含量，重復做3次。結(jié)果見表4所示。 表4最優(yōu)方案所得多糖含量（略） 2.3.3醇沉法精制取3份藥材提取液，每
6、份10ml，分別加入95%乙醇，使乙醇濃度達到70%，冰箱內(nèi)靜置24h，然后過濾，濾液再加入95%乙醇，使乙醇濃度達到90%，冰箱內(nèi)靜置24h，過濾，濾渣水溶解，定容至50ml容量瓶中，精密吸取2ml置50ml容量瓶中，定容至刻度，即得醇沉法供試液。用“2.1.2”項條件測定多糖的含量，重復做3次?！ ?.3.4殼聚糖吸附法精制殼聚糖吸附劑的配制：將殼聚糖用1%醋酸配成1%溶液。殼聚糖吸附劑的用量確定：取20份桑黃水提液，每份5ml，分別加入殼聚糖吸附劑5，10，15，20，25，30，……100d，結(jié)果加入殼聚糖吸附劑25d時澄明度最好。殼聚糖吸附法精制工藝：取
7、3份桑黃，每份25ml，分別加入殼聚糖吸附劑125d，置60℃的水浴上加熱并以攪拌速度為100r/min的攪拌15min，放置至澄清為止，過濾，濾液置100ml容量瓶中定容至刻度，精密稱取1ml置25ml容量瓶中，定容至刻度，用“2.1.2”條件測定多糖的含量，重復做3次。 2.3.5多糖含量比較分別按以上兩種方法測定桑黃多糖的含量,按下式進行計算。結(jié)果見表5?！ 《嗵呛浚?）=（C×D/.A.Curtis)Teng［J］.BioresourceTechnology，2003,89（1）:81.
