超聲法提取桑黃總黃酮的工藝研究

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1、超聲法提取桑黃總黃酮的工藝研究作者：夏國(guó)華，戈延茹，傅海珍，戚雪勇【摘要】目的：研究超聲法提取桑黃中總黃酮的最佳工藝。方法：設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，采用超聲輔助提取，對(duì)桑黃中總黃酮的提取工藝進(jìn)行研究。結(jié)果：以總黃酮提取率為指標(biāo)，得出超聲法提取桑黃總黃酮的最佳工藝為乙醇濃度70%，提取溫度45℃，料液比1∶30，提取時(shí)間45min。結(jié)論：該工藝提取桑黃中總黃酮，方法簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，提取率高?！娟P(guān)鍵詞】桑黃;總黃酮;超聲提取;正交設(shè)計(jì)　　[Abstract]Objective:ThebestextractiontechniqueoftotalflavonoidsfromPhellinusVanin

2、iiwithultrasonicassistedtechniquewasexplored.Methods：Theorthogonaldesignwasusedintheresearchontheultrasonicassistedtechniqueextractiontechnique.Results：Theoptimumconditionsoftheextractionwereasfollows:ethanol70%;extractingtemp45℃;theratioofsolidtoliquid1∶30;extractingtime45min.Conclusion：Thi

3、sprocesswasfeaturedbyhigherextractionrateandshorterextractiontime.8　　[Keywords]PhellinusVaninii;totalflavonoids;ultrasonic;orthogonaldesign　　桑黃屬擔(dān)子菌亞門、多孔菌科,又稱桑臣、桑耳、胡孫眼、孔菌等,是一種珍貴的藥用真菌，在我國(guó)傳統(tǒng)中藥中用于治療痢疾、盜汗、血崩等[1]。目前主要應(yīng)用于肝炎及癌癥的治療，其特有的抗腫瘤活性及低毒性使其成為研究熱點(diǎn)[2,3]。桑黃主要化學(xué)成分為多糖和黃酮。現(xiàn)有的關(guān)于桑黃的文獻(xiàn)報(bào)道中，提取桑黃總黃酮多采用乙醇浸提或

4、回流提取，試驗(yàn)耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，且提取率不理想[4]。　　本研究采用超聲輔助提取，并對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)化。　　1儀器與試劑　　1.1儀器　　KQ250B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);RotavaporR200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國(guó)Buchi公司);FD1C50冷凍干燥機(jī)(北京博醫(yī)康技術(shù)公司);UV2401型紫外分光光度儀(日本島津公司)?！　?.2試劑8　　蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(南京澤朗，經(jīng)高效液相色譜法檢測(cè)純度大于99%);桑黃子實(shí)體(PhellinusVaninii，長(zhǎng)白山區(qū)楊樹野生桑黃，購(gòu)自延吉長(zhǎng)白山特產(chǎn)經(jīng)營(yíng)部，本院張朝輝教授鑒定);水為實(shí)驗(yàn)室自制去離子水，提取乙醇(廣源醫(yī)藥，藥

5、用規(guī)格)，其余試劑為分析純?！　?提取工藝　　2.1提取方案　　準(zhǔn)確稱取60目桑黃子實(shí)體粉末15g，加入一定體積的乙醇，室溫下浸泡12h后超聲提取，殘?jiān)孟嗤瑵舛群腕w積的乙醇再超聲提取一次，合并兩次提取液，回收乙醇，濃縮液冷凍干燥，得到桑黃提取物?！　?.2黃酮的定性反應(yīng)　　2.2.1鹽酸-鎂粉反應(yīng)少量提取物用乙醇溶解，加少許鎂粉，濃鹽酸3～4滴。加入鎂粉前溶液呈暗黃色，滴加濃鹽酸后有泡沫產(chǎn)生，且升騰的泡沫呈橙紅色?！　?.2.2濃氨水反應(yīng)8提取物乙醇溶液點(diǎn)在濾紙上，置于濃氨水上方30s，紫外燈下觀察，顯黃色熒光斑點(diǎn)?！　?.2.3薄板層析提取物乙醇溶液點(diǎn)于硅膠板上，展開劑(正丁醇

6、∶醋酸∶水=4∶1∶5)中展開，置于紫外燈下觀察，顯黃色熒光斑點(diǎn)?！　?.3UV法測(cè)定桑黃總黃酮的含量[5]　　2.3.1溶液的配制準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品23.2mg，用70%乙醇溶解并定容至50ml，作為標(biāo)準(zhǔn)液備用。稱取0.8g硼酸和1.0g乙酸鈉，用70%乙醇溶解并定容至100ml，作為絡(luò)合試劑?！　?.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)蘆丁溶液0.5,1.5,2.0,2.5,3.0ml,加70%乙醇定容至25ml。分別精密吸取上述溶液5ml，加5ml絡(luò)合試劑混勻后，384nm處測(cè)光密度?！　∫怨饷芏菵為縱坐標(biāo)，蘆丁濃度C(μg·ml-1)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得蘆丁濃度(C)與光密度(

7、D)關(guān)系曲線的回歸方程式：D=0.03C-0.0182，R2=0.9992?！　?.4正交試驗(yàn)　　2.4.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)8選取乙醇濃度、提取溫度、料液比和提取時(shí)間作為4個(gè)影響提取的因素，設(shè)計(jì)L9(34)的4因素3水平正交試驗(yàn)。如表1所示。表1正交試驗(yàn)因素與水平表　　2.4.2總黃酮提取率分別準(zhǔn)確稱取各提取條件下的提取物約17.3mg，加70%乙醇定容至25ml。精密吸取各樣品液1.5ml，加70%乙醇定容至25ml。分別精密吸取5ml與5ml絡(luò)合試劑充分混合，384n