光合細(xì)菌的菌種分離和菌種保存技術(shù)

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1、4光合細(xì)菌的菌種分離和菌種保存技術(shù)?菌種的分離，是從它生活的環(huán)境中，與混雜的微生物群分離出來。這是獲得優(yōu)良菌株最基本且必要的手段。菌種大量培養(yǎng)目前應(yīng)用於有機(jī)廢水淨(jìng)化和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)上的光合細(xì)菌，主要是紅螺菌科中稱為紫色非硫細(xì)菌中的一些種類，包括紅螺菌屬（Rhodosirillum）、紅假單胞菌屬（Rhodopseudomonas）、和紅微菌屬（Rhodomicrobium）在內(nèi)的三個屬，共同特徵是具鞭毛有運(yùn)動性，不產(chǎn)生氣泡，細(xì)胞內(nèi)不積累硫化物。採樣：光合細(xì)菌生長條件，主要有水、有機(jī)質(zhì)和厭氧環(huán)境。因此，在河底、海

2、底的泥土及水田、溝渠等經(jīng)常含有有機(jī)物的泥土上，有著呈橙黃色、粉紅色塊狀沉積物的泥土，都可以採取分離光合細(xì)菌的樣品。培養(yǎng)方式：目前在水產(chǎn)養(yǎng)殖上應(yīng)用的光合細(xì)菌，主要是光合異營型紅螺菌科，其中以紅假單胞菌屬（Rhodopseudomonas）為主。採用的養(yǎng)殖方法有兩種，全封閉的厭氣光照培養(yǎng)方式，開放式的微氣光照培養(yǎng)方式。全封閉式的厭氣光照培養(yǎng)採用無色透光的容器，消毒後裝入培養(yǎng)液，接入20~50%的菌種母液，將容器中灌滿培養(yǎng)液，加蓋造成厭氣的培養(yǎng)環(huán)境。，置於有陽光的地方或用人工光源進(jìn)行培養(yǎng)，達(dá)到指數(shù)生長期高峰時(shí)，可

3、作為菌種器液接種。開放試微氣光照培養(yǎng)可採用100-200L容量的的塑膠桶或500L容量的豐年蝦孵化桶為培養(yǎng)容器。在底部裝打氣石，培養(yǎng)時(shí)微充氣，使桶內(nèi)光合細(xì)菌上下緩緩翻動。在桶的正上方約30cm左右加裝人工光源，使液面照度達(dá)2000lux。容器消毒後裝入培養(yǎng)液，接入20~50%的菌種母液，照明，微充氣培養(yǎng)。培養(yǎng)基對培養(yǎng)光合自營型細(xì)菌，一般用無機(jī)鹽為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入適量的碳酸氫鹽作為二氧化碳的來源，用磷酸調(diào)整pH7.0~8.0，然後加入0.05~0.1%的Na2S．9H2O作為電子供體和供氫體，在光照厭氣環(huán)境，

4、20~30℃培養(yǎng)。培養(yǎng)光合異營型的細(xì)菌則需在無機(jī)鹽培養(yǎng)基中再加入0.2%酵母膏、0.25%乙酸鈉、0.02%丙酸鈉和5%NaHCO3，調(diào)整其pH至7.0-8.0，根據(jù)環(huán)境需求而定。紅螺菌科配方NH4Cl1.0gNaCl0.5-2.0gNaHCO3*11.0T．m．儲液*210mlK2HPO40.2生長素輔助因子儲液*31mlCH3COONa1-5g蒸餾水*41000mlMgSO4．7H2O0.2gpH*47.0著色菌科配方NH4Cl1.0gMgCl0.2gNaHCO31.0gT．m．儲液*210mlK2HP

5、O40.5g蒸餾水*41000mlNa2S*51.0gpH*48.0-8.5綠桿菌科配方NH4Cl1.0gMgCl0.2gNaHCO31.0gT．m．儲液*210mlK2HPO40.5g蒸餾水*41000mlNa2S*51.0gpH*47.3*1事先製備5%NaHCO3水溶液，經(jīng)過濾除菌，取20ml與另外經(jīng)高壓滅菌的培養(yǎng)基混合*2微量元素儲液：FeCl35mg、CuSO4．5H2O0.05mg、H3BO31mg、MnCl2．5H2O0.05mg、ZnSO4．7H2O1mg、CO（NO3）2．6H2O0.5m

6、g、蒸餾水1000ml*3生長輔助因子：維生素B1、P-胺基苯甲酸、根據(jù)不同菌種加入。*4光合細(xì)菌如為海水種，改用人工海水，並調(diào)整pH值*5事先製備10%Na2S水溶液，經(jīng)過濾除菌，取10ml與另外經(jīng)高壓滅菌的培養(yǎng)基混合。培養(yǎng)紅硫菌（Chromatium）時(shí)，可再Na2S水溶液中加入0.2%馬來酸鈉等有機(jī)酸來促進(jìn)生長。培養(yǎng)方法光合細(xì)菌的培養(yǎng)，按次序分為容器、工具的消毒，培養(yǎng)基的製備，接種和培養(yǎng)管理四個步驟。容器、工具的消毒，參考微藻培養(yǎng)方法部分。培養(yǎng)基的製備淡水種光合細(xì)菌使用消毒過的淡水製備，生產(chǎn)培養(yǎng)可用消

7、毒的自來水（或井水）配製。如果培養(yǎng)海水種光合細(xì)菌則用天然海水配製培養(yǎng)基，在海水中加入磷元素時(shí)，不能用K2HPO4，應(yīng)用KH2PO4，不然會產(chǎn)生大量沉澱。滅菌和消毒菌種培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應(yīng)連同培養(yǎng)容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。大型生產(chǎn)性培養(yǎng)則把經(jīng)沉澱砂濾後的水用漂白液消毒後使用。培養(yǎng)基配製根據(jù)所培養(yǎng)種類的營養(yǎng)需要選擇合適的培養(yǎng)基配方。按培養(yǎng)基配方把所需物質(zhì)稱量，逐一溶解，混合，配成培養(yǎng)基。也可先配成母液，使用時(shí)按比例加入一定的量即可。接種培養(yǎng)基配好後，應(yīng)立即進(jìn)行接種。光合細(xì)菌生產(chǎn)性培養(yǎng)的接種量需求較高，一般為20％～

8、50％，即菌種母液量和新配培養(yǎng)液雖之比為1：4～1：1，不應(yīng)低於20％，尤其是微氣培養(yǎng)，接種量更應(yīng)高些，否則光合細(xì)菌在培養(yǎng)液中很難佔(zhàn)絕對優(yōu)勢，影響最終產(chǎn)量和質(zhì)量。培養(yǎng)管理光合細(xì)菌的培養(yǎng)過程中，管理工作包括日常管理操作和測試，生長情況的觀察、檢查以及出現(xiàn)問題的分析處理等三個方面。日常管理和測試攪拌和打氣：光合細(xì)菌培養(yǎng)過程中必須幫助沉澱的光合細(xì)菌上浮獲得光照，保持菌細(xì)胞的良好生長。大型厭氣培養(yǎng)則用機(jī)械攪拌或使用小型沉