菌種的培養(yǎng)、傳代和保存

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1、菌種的培養(yǎng)、傳代和保存云南省玉溪市食品藥品檢驗(yàn)所云南玉溪653100摘要：控制好菌種的培養(yǎng)、傳代和保存方法就控制好菌種的質(zhì)量。關(guān)鍵詞：菌種；培養(yǎng)；傳代；保存微牛.物只有牛.命活力，隨著菌種培養(yǎng)和保存時間的延長或菌種的多次轉(zhuǎn)接傳代，菌種木身所異有的優(yōu)良的遺傳性狀可能得到延續(xù)，也可能發(fā)生變異。因此，在保存過程中，必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對靜止的狀態(tài)，才能在一定的時間內(nèi)使其不發(fā)生變異而乂保持生活能力。低溫、干燥和隔絕空氣是使微牛.物代謝能力降低的重要因素，菌種保存方法都是根據(jù)這三個因素而設(shè)計(jì)的。控制好菌種的培養(yǎng)、傳代和

2、保存方法就控制好菌種的質(zhì)量。故應(yīng)選用合適的培養(yǎng)基，控制菌種培養(yǎng)的條件，使其優(yōu)良性狀得到延續(xù)；控制傳代次數(shù)從而防止菌種的退化；控制保存的條件，使細(xì)胞處于休眠狀態(tài)，采用合適的保存方法，以延忪蘭種保存的時間。1.實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備1.1儀器設(shè)備BHC-1300IIA2型生物安全柜(蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)、DW-86L486型海爾超低溫冰箱(青島海爾特種電器有限公司)、BCD-215DF型海爾冰箱(青島海爾股份有限公司)、HRLM-80型海爾立式蒸汽滅菌器(青島海爾特種電器有限公司)、YQX-1I型厭氧培養(yǎng)箱(上海新苗醫(yī)療器械制造有限公

3、同)、SPX-150型生化培養(yǎng)箱(揚(yáng)州慧科電子有限公司)。1.2菌種短小芽孢桿菌［CMCC(B)63202］、枯草芽孢桿菌［CMCC(B)63501］、藤黃微球菌［CMCC(B)28001］、大腸埃希菌［CMCC(B)44102］、乙型副傷寒沙門氐菌［CMCC(B)50094］、金黃色葡萄球菌［CMCC(B)26003］、銅綠假單胞菌［CMCC(B)10104］、生孢梭菌［CMCC(B)64941】、白色念珠菌［CMCC(F)98001］、黑曲霉［CMCC（F）98003］、志賀氏菌［CMCC（B）51572］、乙型溶血性

4、鏈球菌［CMCC（B）32210］、單核細(xì)胞增生李斯特菌［CMCC（B）54002】、小腸結(jié)腸炎耶耳森氏菌［CMCC（B）52204］、蠟樣芽胞桿菌［CMCC（B）63303】、阪崎腸桿菌ATCC29544、副溶血性弧菌ATCC17802、產(chǎn)氣莢膜梭菌ATCC13124、糞鏈球菌ATCC29212大腸埃希氏菌0157CICC10907,均為凍干質(zhì)控菌種。1.3培養(yǎng)基腦心浸液（批號：140211）、、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號：131210）、血平板（批號：F0789丫廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）、胰蛋白胨大豆酵母浸膏瓊脂（批號：

5、140402）、皰肉牛肉粒肉湯（批號：140722）、蛋白胨水（批號：140820）、沙氏液體培養(yǎng)基（批號：140702）、馬鈴薯葡萄糖瓊脂（批號：140310）以上培養(yǎng)基為北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。1.菌種的培養(yǎng)、傳代和保存菌種的復(fù)蘇和傳代在生物安全枳及無菌條件下操作。打開菌種西林瓶膠塞，加入0.3ml液體培養(yǎng)基后，用無菌滴管反復(fù)吹吸溶解為懸液，移至斜面、平板或液體培養(yǎng)基后，連同剩余菌懸液的西林瓶一起培養(yǎng)。次日觀察菌種的生長情況，如未生長，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)24小時，或取培養(yǎng)之后的菌懸液再次接種培養(yǎng)基，培養(yǎng)24小吋.復(fù)蘇后的

6、菌種在傳1-2代后使用，使用代數(shù)不超過5代，5代后應(yīng)銷毀。2.1方法一用無菌吸管往金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、大腸埃希氏菌0157、志賀氏菌、阪崎腸桿菌、小腸結(jié)腸炎耶耳森氏菌、枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、藤黃微球菌、蠟樣芽胞桿菌、乙型副傷寒沙門氏菌西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養(yǎng)基，充分懸浮后取適量的菌懸液于營養(yǎng)瓊脂斜面上劃線，36°C培養(yǎng)24-48小吋。斜面放于4°C冰箱保存，每個月轉(zhuǎn)接一次，代數(shù)以此類推。2.2方法二用無菌吸管往銅綠假單胞菌西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養(yǎng)基，充分懸浮后取適量的菌懸液于營養(yǎng)瓊脂斜面上劃線

7、，36°C培養(yǎng)24-48小吋。斜面放于25°C保存，每個月轉(zhuǎn)接一次，代數(shù)以此類推。傳代時，銅綠假單胞菌的綠色若變淡或無綠色，可用溴化十六烷基三甲銨瓊脂替換營養(yǎng)瓊脂。2.3方法三用無菌吸管往糞鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養(yǎng)基，充分懸浮后取適量的菌懸液于血平板后涂布,36°C培養(yǎng)24-48小吋。血平板用封口膜密封，放于4°C冰箱保存，每半個月轉(zhuǎn)接一次，代數(shù)以此類推。2.4方法四用無菌吸管往單核細(xì)胞增生李斯特菌西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養(yǎng)基，充分懸浮后取適量的菌懸液于胰蛋白胨大豆酵母浸膏瓊脂斜面上，

8、36°C培養(yǎng)24-48小時。斜面放于4°C冰箱保存，每個月轉(zhuǎn)接一次，代數(shù)以此類推。2.5方法五用無菌吸管往生孢梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養(yǎng)基，充分懸浮后取適量的菌懸液于皰肉牛肉粒肉湯加液體石蠟lcm,36"C培養(yǎng)48-72小吋。肉湯放于4°C冰箱保存，每半個月轉(zhuǎn)接一次，代數(shù)以此類推