橘荔散結(jié)丸對子宮肌瘤組織和子宮肌層組織雌激素受體α、β亞型表達(dá)水平的影響及作用機(jī)理

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1、橘荔散結(jié)丸對子宮肌瘤組織和子宮肌層組織雌激素受體α、β亞型表達(dá)水平的影響及作用機(jī)理【關(guān)鍵詞】子宮肌瘤/中藥療法；橘荔散結(jié)丸/治療應(yīng)用；受體，雌激素/藥物作用臨床醫(yī)學(xué)論文咨詢1204795366電話0512-5376-9693子宮肌瘤是女性生殖器官中最常見的良性腫瘤，目前研究認(rèn)為它是一種雌激素依賴性腫瘤，在生育期發(fā)生、發(fā)展，在絕經(jīng)后逐漸萎縮，提示雌激素是子宮肌瘤生長的促進(jìn)劑，而雌激素是通過其兩種受體亞型（ERα、ERβ）發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)〔1-2〕。橘荔散結(jié)丸是已故全國著名婦科專家羅元愷教授所創(chuàng)制，臨床應(yīng)用20多年，療效顯著，我們前期研究〔3-5〕發(fā)現(xiàn)該藥能明顯改善患者臨床癥狀，調(diào)控子宮肌瘤組織

2、雌激素受體（estrogenreceptor,ER）、孕激素受體（progesteronereceptor,PR）及PRmRNA的表達(dá)。為了進(jìn)一步探討其作用機(jī)理，明確ERα、ERβ亞型與子宮肌瘤的關(guān)系，我們于2007年1月至2008年3月進(jìn)行了相關(guān)臨床研究。1資料與方法1.1病例來源參考《女病診療全書》〔6〕中“中藥新藥治療子宮肌瘤臨床研究指導(dǎo)原則”的診斷、納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，選自2007年1月～2008年3月廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科行全子宮切除術(shù)或子宮次全切術(shù)患者共40例，其中在門診觀察治療服用橘荔散結(jié)丸1個療程（３個月）有手術(shù)指征且要求手術(shù)者２０例為治療組，未曾服用中西藥物而要求手術(shù)者

3、２０例為對照組。治療組年齡３０～５２歲，平均（４０.７５±７.００）歲；病程1個月～8年，平均（2.17±1.0）年；肌瘤平均體積為（31.69±11.04)cm3。對照組年齡29～52歲，平均（37.9±6.37)歲，病程2個月～5年，平均（2.15±0.96)年；肌瘤平均體積為（26.62±5.80）cm3。兩組患者的年齡、病程、肌瘤體積經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，差異無顯著性意義（P＞0.05），具有可比性。1.2治療方法治療組：口服橘荔散結(jié)丸（藥用橘核、荔枝核、川續(xù)斷、小茴香、烏藥、川楝子、海藻、莪術(shù)、制首烏、崗稔根、黨參、生牡蠣、風(fēng)粟殼、益母草等，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑室制備），每次6

4、粒，每天3次，以3個月為1個療程，服用1個療程后行手術(shù)治療。對照組：未曾服用中西藥物而直接行手術(shù)治療。1.3觀察指標(biāo)1.3.1標(biāo)本收集于術(shù)后取瘤體中心組織1.0cm×1.0cm×0.2cm及其周圍同樣大小的正常肌層組織,用中性福爾馬林固定。1.3.2試劑鼠抗人單克隆ERα、ERβ一抗抗體均購自廣州威佳科技有限公司;PV6001兔二抗購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。1.3.3ERα、ERβ檢測方法取出中性福爾馬林固定的組織標(biāo)本,石蠟包埋,5μm連續(xù)切片后常規(guī)脫蠟,流水沖流2min后用3%H2O2消耗內(nèi)源性過氧化物酶10min,流水沖流后放入pH=6的枸櫞酸抗原修復(fù)液高壓鍋中修復(fù)5min,待其自

5、然冷卻,再用PBS漂洗3次,每次5min,正常血清封閉,室溫10min,加入鼠抗人單克隆ERα1∶200,ERβ1∶50，37.8℃反應(yīng)1h后，加用一抗增敏劑反應(yīng)30min，再用PBS漂洗3次，每次5min，加入生物素標(biāo)記二抗，室溫20min，用PBS漂洗3次，每次5min，DAB顯色5min，自來水沖洗，蘇木素淺染色，鹽酸分化，氨水返藍(lán)，吹風(fēng)機(jī)封干，中性樹膠封固，電鏡下計算每100個組織細(xì)胞中黃染的細(xì)胞數(shù)（ERα、ERβ表現(xiàn)為細(xì)胞核染色），計為陽性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)（ERα、ERβ陽性細(xì)胞數(shù)）。1.3.4結(jié)果判定按染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)判定分4級：不著色為陰性（-）；＜50%細(xì)胞著黃色或均著

6、淡黃色為弱陽性（±）；＜50%細(xì)胞著棕黃色或＞50%細(xì)胞著黃色為陽性（+）；＞50%細(xì)胞著棕黃色為強(qiáng)陽性（++）。根據(jù)染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞所占百分比用組織化學(xué)評分（HSCORE）方法計算積分。染色強(qiáng)度自輕到重分為0、1、2、3四級。積分計算分式為：s積分=（i+1）×R；i為染色強(qiáng)度，R為陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS13.0ForWindows統(tǒng)計軟件處理，計量資料采用t檢驗。2結(jié)果兩組子宮肌瘤組織和子宮肌層組織ERα、ERβ表達(dá)水平比較見表1。結(jié)果顯示：（1）治療組和對照組患者的子宮肌瘤組織和肌層組織均存在ERα、ERβ表達(dá)，且肌瘤組織中ERα、ERβ表達(dá)顯著高于肌層組織（P

7、＜0.01），同時發(fā)現(xiàn)肌瘤組織與肌層組織中ERα表達(dá)水平顯著高于ERβ表達(dá)水平（P＜0.05）。（2）治療組子宮肌瘤組織局部ERα、ERβ表達(dá)水平顯著低于對照組（P＜0.01），提示橘荔散結(jié)丸能顯著降低子宮肌瘤組織局部ERα、ERβ的表達(dá)水平。（3）治療組子宮肌層組織局部ERα表達(dá)水平顯著低于對照組（P＜0.05），而子宮肌層組織局部ERβ表達(dá)水平，治療組與對照組比較差異無顯著性意義（P＞0.05），提示橘荔