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《磁分離酶聯(lián)免疫熒光法（meif）檢測人血清中胰島素的論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、磁分離酶聯(lián)免疫熒光法（MEIF）檢測人血清中胰島素的論文【摘要】 目的:采用磁微粒分離酶聯(lián)免疫熒光（meif）分析技術建立一種簡便、高敏感性、定量檢測人血清胰島素(insulin)的新方法。方法:選用2株識別人胰島素不同表位的單克隆抗體(mab)。一株mab用異硫氰酸熒光素（fitc）標記,另一株用堿性磷酸酶(ap)標記;偶聯(lián)羊抗fitc抗體的磁珠用作固相分離載體,4-甲基磷酸傘型酮用作熒光底物。結果:成功建立了定量檢測人血清胰島素的meif,靈敏度2.0μiu/ml,線形范圍0～188.52μiu/ml,批內(nèi)變異系數(shù)(cv)為4.3%～
2、5.2%,批間cv為2.6%～9.5%,稀釋回收率為93%～117%,加標回收率為94%～113%。實際樣品的測定結果與倍愛康公司商品化人insulin磁分離發(fā)光系統(tǒng)檢測試劑盒的檢測結果比較,具有良好的相關性。結論:meif定量測定人insulin方法成本低、靈敏度高、穩(wěn)定性好,在臨床免疫檢測領域具有廣闊的應用前景。【關鍵詞】酶聯(lián)免疫分析免疫熒光4-甲基磷酸傘型酮磁珠胰島素 establishmentofthemagicseparationenzymeimmunofluorescencemethodfordetectinginsulin
3、 xiejing,liuzhen-shi,hushan,cairu-xiu,yanghai,yangxiang-liang* collegeoflifescienceandtechnology,huazhongscienceandtechnologyuniversity,:toestablishaconvenientandsensitivemagicseparationenzymeimmunofluorescence(meif)methodfordetectinghumaninsulin.methods:tonoclonalantibod
4、ies(mabs)agicsolidphaseseparation.magicbeadsethylumbelliferyl-phosphoricacid(4-mup)elffordetectinginsulin.results:thesensitivityofthisassayl,thelinearrange0μiu/mlto188.52μiu/ml,andtheintra-assayvariationandinter-assayvariationagicenzymechemiluminescenceimmunoassaysystem.co
5、nclusion:themeiffordetectinginsulinislomunedetection. ?。踜eyeimmunoassay;immunofluorescence;4-methylum-belliferyl-phosphoricacid;magicbeads;insulin 糖尿病是我國最常見的內(nèi)分泌疾病,發(fā)病率約為1.3‰,我國每年約有2.7萬新增患者。.糖尿病給患者家庭和社會帶來巨大的經(jīng)濟損失（每年高達100億人民幣）和沉重的精神傷害［1］。隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變,糖尿病發(fā)病趨于年輕化［2］。血清胰島
6、素（insulin）含量測定是糖尿病診斷和治療過程中重要的血清檢查項目,對于糖尿病的診斷和治療具有重要意義。常規(guī)檢測胰島素的方法主要有放射免疫法和酶聯(lián)免疫吸附法等,但存在著放射污染或靈敏度低,操作復雜等不足。本研究旨在建立一種檢測人血清胰島素的新方法-磁分離酶免疫熒光法(magicenzymeimmunofluorescence,meif),實現(xiàn)對人血清胰島素的定量、敏感和快速檢測。 1材料和方法 1.1材料4-甲基磷酸傘型酮（4-mup）購自sigma公司。磁分離試劑、洗液、胰島素標準品及抗人胰島素單克隆抗體（mab）fitc和ap連
7、接物由北京倍愛康生物技術有限公司提供。二乙醇胺（dea）和三乙醇胺（tea）購自fluka公司。victorⅲ型熒光檢測儀為珀金埃爾默(perkinelmer)公司產(chǎn)品。專用于酶標板的磁分離器為自行研制。恒溫箱為上海實驗儀器公司產(chǎn)品。白色未標記酶標板為greinermicrolon生產(chǎn)?！ ?.2方法 1.2.1mab標記物的工作濃度選擇將倍愛康公司提供的fitc標記抗人胰島素mab1和ap標記mab2,用tris緩沖液稀釋至不同濃度,以檢測靈敏度高、非特異結合低為原則［3］選擇標記抗體的最佳工作濃度?！ ?.2.2探索meif檢測人胰島
8、素的最佳條件通過對ap催化4-mup反應條件的探索、優(yōu)化;對各種檢測條件如標準品、磁分離試劑、熒光底物和標記抗體用量,溫育時間等條件進行全面探索后確定檢測的最佳條件?！ ?.2.
