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《磁分離酶聯(lián)免疫熒光法MEIF檢測(cè)人血清中胰島素》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、磁分離酶聯(lián)免疫熒光法（MEIF）檢測(cè)人血清中胰島素作者：謝晶,劉振世,胡珊,蔡汝秀,楊海,楊祥良【摘要】 目的:采用磁微粒分離酶聯(lián)免疫熒光（MEIF）分析技術(shù)建立一種簡(jiǎn)便、高敏感性、定量檢測(cè)人血清胰島素(insulin)的新方法。方法:選用2株識(shí)別人胰島素不同表位的單克隆抗體(mAb)。一株mAb用異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記,另一株用堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記;偶聯(lián)羊抗FITC抗體的磁珠用作固相分離載體,4-甲基磷酸傘型酮用作熒光底物。結(jié)果:成功建立了定量檢測(cè)人血清胰島素的MEIF,靈敏度2.0μIu/mL,線形范圍0～188.52μIu/mL,批內(nèi)變異系數(shù)(CV)為4.
2、3%～5.2%,批間CV為2.6%～9.5%,稀釋回收率為93%～117%,加標(biāo)回收率為94%～113%。實(shí)際樣品的測(cè)定結(jié)果與倍愛康公司商品化人insulin磁分離發(fā)光系統(tǒng)檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)結(jié)果比較,具有良好的相關(guān)性。結(jié)論:MEIF定量測(cè)定人insulin方法成本低、靈敏度高、穩(wěn)定性好,在臨床免疫檢測(cè)領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景?！娟P(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫分析免疫熒光4-甲基磷酸傘型酮磁珠胰島素 ［Abstract］AIM:Toestablishaconvenientandsensitivemagneticseparationenzymeimmunofluorescence(MEIF)1
3、0methodfordetectinghumaninsulin.METHODS:Twomonoclonalantibodies(mAbs)wereconjugatedwithFITCandalkalinephosphatase(AP)respectively,whichwereincorporatedmagneticsolidphaseseparation.Magneticbeadswerecoupledwithsheepanti-FITCantibodyassolidphaseand4-Methylumbelliferyl-phosphoricacid(4-MUP)was
4、usedassubstratetosetupMElFfordetectinginsulin.RESULTS:Thesensitivityofthisassaywas2.0μIu/mL,thelinearrangewasfrom0μIu/mLto188.52μIu/mL,andtheintra-assayvariationandinter-assayvariationwere4.3%-5.2%and2.6%-9.5%,respectively.Therecoveryrateofdilutionwas92.6%-117%andtherecoveryrateofaccession
5、was106%-121%.Theresultoftheassaycorrelatedwellwiththatofmagneticenzymechemiluminescenceimmunoassaysystem.CONCLUSION:TheMEIFfordetectinginsulinislowatcost,sensitive,specificandstable,whichcanbewidelyusedinclinicalimmunedetection. ?。跭eywords］enzymeimmunoassay;immunofluorescence;4-Methylum-be
6、lliferyl-phosphoricacid;magneticbeads;insulin 糖尿病是我國(guó)最常見的內(nèi)分泌疾病,發(fā)病率約為1.3‰10,我國(guó)每年約有2.7萬新增患者。糖尿病給患者家庭和社會(huì)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失（每年高達(dá)100億人民幣）和沉重的精神傷害［1］。隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變,糖尿病發(fā)病趨于年輕化［2］。血清胰島素（insulin）含量測(cè)定是糖尿病診斷和治療過程中重要的血清檢查項(xiàng)目,對(duì)于糖尿病的診斷和治療具有重要意義。常規(guī)檢測(cè)胰島素的方法主要有放射免疫法和酶聯(lián)免疫吸附法等,但存在著放射污染或靈敏度低,操作復(fù)雜等不足。本研究旨在建立一種檢測(cè)人血
7、清胰島素的新方法-磁分離酶免疫熒光法(magneticenzymeimmunofluorescence,MEIF),實(shí)現(xiàn)對(duì)人血清胰島素的定量、敏感和快速檢測(cè)?！ ?材料和方法 1.1材料4-甲基磷酸傘型酮（4-MUP）購(gòu)自Sigma公司。磁分離試劑、洗液、胰島素標(biāo)準(zhǔn)品及抗人胰島素單克隆抗體（mAb）FITC和AP連接物由北京倍愛康生物技術(shù)有限公司提供。二乙醇胺（DEA）和三乙醇胺（TEA）購(gòu)自Fluka公司。VictorⅢ型熒光檢測(cè)儀為珀金埃爾默(PerKinElmer)公司產(chǎn)品。專用于酶標(biāo)板的磁分離器為自行研制
