響應(yīng)面分析法優(yōu)化小魚仙草總黃酮的提取工藝研究

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1、響應(yīng)面分析法優(yōu)化小魚仙草總黃酮的提取工藝研究：嚴(yán)云良呂佩惠余陳歡【摘要】目的：確定小魚仙草總黃酮的最佳提取工藝條件。方法：以乙醇回流提取法提取小魚仙草總黃酮，采用分光光度法測定總黃酮的含量，以總黃酮提取得率為考察指標(biāo)，考察溶媒倍數(shù)、提取時(shí)間和提取次數(shù)等因素對(duì)小魚仙草總黃酮提取得率的影響，利用響應(yīng)面分析法優(yōu)化提取工藝，確定總黃酮的最佳提取工藝。結(jié)果：小魚仙草總黃酮的最佳提取工藝為：加藥材20倍量濃度為70%乙醇，于90℃水浴回流提取3次，每次1.9h。此工藝下小魚仙草總黃酮的提取得率達(dá)8.50%。結(jié)論：該工藝提取得率高、操作簡便，易于工業(yè)化大生產(chǎn)?！娟P(guān)鍵詞】小魚仙草;

2、黃酮;響應(yīng)面分析法小魚仙草為唇形科石薺苧屬一年生草本植物Mosladianthera的全草，別名疏花薺苧、野香薷等。具有祛風(fēng)發(fā)表、利濕止癢之功效，主治感冒發(fā)熱、扁桃體炎、中暑頭痛、潰瘍病等[1]。有關(guān)小魚仙草揮發(fā)油的研究報(bào)道較多，其揮發(fā)油主要含有香荊芥酚、百里香酚、芳香醇和丁香烯等成分，具有較好的抑菌作用[2];而對(duì)小魚仙草非揮發(fā)性部位的研究報(bào)道較少?，F(xiàn)代研究表明，其非揮發(fā)性部位主要含有黃酮、酚酸等成分，具有抗菌、抗氧化、抗變態(tài)反應(yīng)等作用[3，4]。目前關(guān)于小魚仙草總黃酮提取工藝優(yōu)化方面的研究少見報(bào)道。僅劉小芬等[5]對(duì)小魚仙草總黃酮的提取工藝作了單因素考察，缺乏多

3、因素間的交互作用分析，具有一定的局限性。而響應(yīng)面分析法(Responsesurfaceanalysismethodology，RSM)是目前比較通用的設(shè)計(jì)分析方法，它通過多元二次回歸方程擬合多因子實(shí)驗(yàn)中多個(gè)因子與響應(yīng)值間的關(guān)系，通過對(duì)方程求極值的方法達(dá)到參數(shù)優(yōu)化的目的[6～9]。本研究在前期單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面分析法，根據(jù)BoxBehnken組合設(shè)計(jì)原理，考察了影響小魚仙草總黃酮回流提取效果的主要因素，確定了其最佳提取工藝條件，為更好地開發(fā)以小魚仙草總黃酮為主的藥物及其制劑提供了實(shí)驗(yàn)參考?！　?儀器與試藥　　osladiantheraMaxim.的地上部

4、分，陰干，粉碎，備用。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品購自中國藥品生物制品檢定所(批號(hào)：10008020030)，所用試劑均為分析純?！　?實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果　　2.1總黃酮的含量測定　　精密稱取105℃干燥恒重的蘆丁對(duì)照品10.6mg，加50%乙醇溶解定容于50mL容量瓶，得濃度為2.12mgomL-1標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分別置25ml容量瓶中，加5%NaNO21.0mL，搖勻，放置6min后加10%Al(NO3)31.0mL，搖勻，放置6min后再加10%NaOH10mL，加50%乙醇稀釋至25ml，混勻，靜置15min，同

5、行試劑作空白，于510nm處測定吸光度[10]，以吸光度值為縱坐標(biāo)，以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A=0.5464C+0.0056，r=0.9997，結(jié)果表明蘆丁在0.212～1.272mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。　　2.2提取工藝研究　　根據(jù)BoxBenhnken的中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，綜合單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在選定乙醇濃度為70%、提取溫度為90℃的前提下，選擇溶媒倍數(shù)、提取時(shí)間和提取次數(shù)3個(gè)因素作為自變量設(shè)計(jì)響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)，分別以X1、X2、X3表示，每個(gè)自變量的低、中、高水平分別以-1、0、1進(jìn)行編碼，以小魚仙草總黃酮提取得率作為響應(yīng)值Y。實(shí)驗(yàn)因素

6、及水平安排見表1。表1實(shí)驗(yàn)因素及水平安排表　　分別精確稱取小魚仙草干燥藥材粉末5.0g，根據(jù)表1選擇的因素和水平，70%乙醇回流提取，過濾，加同濃度的乙醇溶液定容至250mL，搖勻，作為供試品溶液。精密移取0.3mL供試品溶液，測定總黃酮含量，計(jì)算總黃酮提取得率，結(jié)果見表2。表2響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果(n=3)注：共有15個(gè)實(shí)驗(yàn)，其中12個(gè)為析因?qū)嶒?yàn)，3個(gè)為中心實(shí)驗(yàn)以估計(jì)誤差?！　〔捎肧AS9.1.3軟件對(duì)表2結(jié)果進(jìn)行響應(yīng)面回歸分析，得擬合方程：Y=8.436667+0.11X1+0.2X2+0.2425X3-0.107083X12+0.1775X1X2+0.0625

7、X1X3-0.077083X22+0.1575X2X3-0.172083X32(R=0.9622)。并作回歸方程顯著性檢驗(yàn)及方差分析，結(jié)果見表3。表3回歸方程的顯著性檢驗(yàn)及方差分析結(jié)果.　　經(jīng)SAS軟件分析計(jì)算后可知，理論最佳回流提取工藝為：加藥材24.30倍量的濃度為70%乙醇于90℃水浴回流提取2.54次，1.85h。在此條件下，小魚仙草總黃酮提取得率理論值為8.78%。綜合考慮實(shí)際操作的簡便及實(shí)驗(yàn)方差分析結(jié)果，確定最佳回流提取工藝為：加藥材20倍量濃度為70%乙醇，于90℃水浴回流提取3次，每次1.9h。按最佳提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，測定小魚仙草總黃酮含量