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1、響應(yīng)面法優(yōu)化廣棗總黃酮的超聲提取工藝研究摘要：采用響應(yīng)面法超聲提取廣棗［Choerospondiasaxillaris(Roxb.)BurttetH川］中總黃酮，在單因素試驗基礎(chǔ)上，利用Design-Expert8.0、5.0軟件設(shè)計響應(yīng)面試驗，研究乙醇溶液體積分數(shù)、液料比、超聲時間和超聲溫度對總黃酮提取率的影響。結(jié)果表明，廣棗中總黃酮的最佳超聲提取工藝參數(shù)乙醇溶液體積分數(shù)為62%，超聲提取時間為55min，液料比為35.00:1(V:m),在此試驗條件下廣棗總黃酮平均提取率為3.472%。關(guān)鍵詞：廣棗［Choerospondias
2、axNlaris(Roxb.)BurttetHill］；總黃酮;超聲提取；響應(yīng)面法中圖分類號：S665.1文獻標識碼：A文章編號:0439-8114(2015)09-2210-04廣棗為漆樹科植物南酸棗［Choerospondiasaxillaris(Roxb.)BurttetHill］的干燥成熟果實，又名五眼果、酸棗、山棗子等，是蒙古族常用藥材［1］。廣棗性味甘、酸，具有行氣活血、養(yǎng)心安神的功能，用于氣滯血瘀、胸痹作痛、心悸氣短、心神不安等病癥的治療。廣棗中的化學(xué)成分包括黃酮、有機酸、甾醇、香豆素、揮發(fā)油、酚酸類、多糖、氨基酸及多
3、種無機元素等［2］。廣棗中的總黃酮是其有效成分，具有多種生理活性作用。目前，廣棗中黃酮類化合物的提取方法主要有醇提熱回流法［3-5］、醇提滲漉法［6］及水煮提取法［7］等，且大多采用正交設(shè)計法研究其提取工藝。本研究在單因素試驗的基礎(chǔ)上，使用響應(yīng)面分析法［8,9］優(yōu)化廣棗中總黃酮的提取工藝，旨在為廣棗的進一步研究開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)和參考。1材料與方法1.1材料、試劑與儀器廣棗藥材（毫州市中藥飲片廠，批號130426），經(jīng)贛南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥鑒定教研室程齊來教授鑒定。蘆丁標準品（A0103,含量彡98%，北京恒元啟天化工技術(shù)研宄院）；無水
4、乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁均為分析純。PELambda35UV/VIS型紫外可見分光光度計（美國珀金埃爾默公司）；FW135型手提中藥粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）；H2002型分析天平（上海精天電子儀器公司）;EYELAN-1001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本東京理化器械）；EYELAA-1000S型水式真空泵（上海愛明儀器有限公司）；202A-2型電熱干燥箱（上海陽光試驗儀器有限公司）；KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。1.2試驗方法1.2.1標準曲線的繪制精確稱取11.15mg蘆丁標準品，用60%乙醇溶液溶解
5、，定容于100mL容量瓶中，搖勻，得到111.5mg八的蘆丁標準溶液。精確量取蘆丁標準溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL,分別置于10.0mL容量瓶中。依次分別加入60%乙醇溶液稀釋至5.0mL，加入5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻，靜置5min再加入0.3mL的10%硝酸鋁溶液，迅速搖勻，靜置6min,最后加入4mL4%氫氧化鈉溶液，混勻，用60%乙醇溶液稀釋至刻度，充分搖勻。放置15min后，以不加蘆丁的試劑作空白對照，測定波長為509nm時的吸光度，得到吸光度（Y）與蘆丁溶液濃度（X）的回歸方程為Y=0.011
6、3X-0.0017,R2=0.9997o1.2.2廣棗總黃酮的超聲提取將廣棗50°C恒溫烘干后粉碎過40目篩，稱取0.5g，加入60%乙醇溶液15mL，浸泡15min后，在70°C下超聲50min，抽濾。待樣品冷卻到室溫后再重復(fù)處理1次。合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑，濃縮后用60%乙醇溶液定容于50mL容量瓶中備用。1.2.3總黃酮含量的測定吸取ImL濾液于10mL容量瓶中，按標準曲線的測定方法測定其吸光度，計算總黃酮含量和提取率。1.2.4單因素試驗①乙醇溶液體積分數(shù)。分析不同乙醇體積分數(shù)（40%、50%>60%、70%、80%
7、）對廣棗總黃酮提取率的影響；②液料比。分析不同液料比（10:1、15:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40：1,mL：g）對廣棗總黃酮提取率的影響；③超聲時間。分析不同超聲時間（20、30、40、50、60、70min）對廣棗總黃酮提取率的影響；④超聲溫度。分析不同超聲溫度（40、45、50、60、70°C）對廣棗總黃酮提取率的影響。1.2.5響應(yīng)面試驗設(shè)計根據(jù)Box-Behnken中心組合試驗設(shè)計原理，綜合單因素試驗結(jié)果，選取乙醇溶液體積分數(shù)（A）、超聲時間（B）、料液比（C）3個對總黃酮提取率影響較大的因素，對提取工
8、藝條件進行響應(yīng)面分析，試驗因素及水平見表1。1.2.6驗證試驗對Box-Behnken中心組合試驗優(yōu)化后的廣棗總黃酮提取工藝進行驗證試驗，重復(fù)3次。2結(jié)果與分析2.1單因素試驗結(jié)果2.1.1乙醇溶液體積分數(shù)對廣棗總黃酮提取率的影響由圖
