中藥復(fù)蘇飲對(duì)嚴(yán)重膿毒癥患者外周血單核細(xì)胞tlr2、tlr4基因表達(dá)的影響論文

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1、中藥復(fù)蘇飲對(duì)嚴(yán)重膿毒癥患者外周血單核細(xì)胞TLR2、TLR4基因表達(dá)的影響論文【摘要】觀察中藥復(fù)蘇飲對(duì)嚴(yán)重膿毒癥患者外周血單核細(xì)胞TLR2、TLR4基因表達(dá)的影響。【方法】將４０例患者隨機(jī)分為復(fù)蘇飲組（治療組）和安慰劑組（對(duì)照組）各２０例，兩組均采用西醫(yī)常規(guī)監(jiān)護(hù)治療，治療組配合使用中藥復(fù)蘇飲（由工人牛黃、西洋參、黃芪、生大黃、生石膏、麥冬、丹參、赤芍、猴棗等組成），而對(duì)照組則加用安慰劑。另選取１５名健康體檢者作為正常組。采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR)法測(cè)定治療前及治療第３、第７天外周血單核細(xì)胞TLR2、TLR4mRNA表達(dá)的變化?！窘Y(jié)果】治療前兩組患者單核

2、細(xì)胞TLR2、TLR4mRNA表達(dá)顯著低于正常組（Ｐ＜０.０５)。對(duì)照組于治療第７天TLR2、TLR4mRNA表達(dá)開(kāi)始明顯升高（Ｐ＜０.０1);治療組于治療第３天TLR2、TLR4mRNA表達(dá)即明顯回升，且治療后各個(gè)觀察點(diǎn)的基因表達(dá)明顯高于對(duì)照組（Ｐ＜０.０５);但兩組的ＴＬＲ２、ＴＬＲ４mRNA表達(dá)均未達(dá)到正常組水平（Ｐ＜０.０５或Ｐ＜０.０1）?！窘Y(jié)論】中藥復(fù)蘇飲可明顯上調(diào)外周血單核細(xì)胞TLR4、TLR2mRNA的表達(dá)，降低嚴(yán)重膿毒癥患者的病死率。【關(guān)鍵詞】膿毒癥中藥療法復(fù)蘇飲治療應(yīng)用Toll樣受體膿毒癥是一種全身感染性疾病。以往研究認(rèn)為，多種病原微生物的細(xì)胞

3、壁成分［如革蘭陰性菌的內(nèi)毒素（LPS），革蘭陽(yáng)性菌的肽聚糖（PGN)和脂磷壁酸（LTA)等］均可通過(guò)與細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)受體CD14結(jié)合.freelolecularpatterns,PAMPs)，激活ＮＦκB信號(hào)通路，啟動(dòng)一系列免疫炎癥反應(yīng)，最終達(dá)到清除入侵的病原微生物的目的，在天然免疫中發(fā)揮重要的抗感染免疫功能。因此，以TLRs信號(hào)受體為靶向，可能為膿毒癥的防治帶來(lái)新的希望。本文通過(guò)觀察中藥復(fù)蘇飲對(duì)嚴(yán)重膿毒癥患者外周血單核細(xì)胞TLR2、TLR4基因表達(dá)的影響，從受體角度初步探討中藥在抗感染免疫中的作用?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。1資料與方法1.1臨床資料1.1.1病例選

4、擇及分組所選病例為２００４年４月至２００５年１１月廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院ICU收治的嚴(yán)重膿毒癥的患者，確診２４h內(nèi)被納入研究。但需除外以下情況：①年齡小于１８歲;②妊娠及哺乳期婦女;③前６個(gè)月內(nèi)接受化療者;④目前或前３個(gè)月內(nèi)接受皮質(zhì)激素或其他免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑治療者;⑤有免疫系統(tǒng)疾病者;⑥人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）陽(yáng)性者;⑦終末期肝功能或腎功能衰竭者;⑧入院２4h內(nèi)死亡者。符合納入標(biāo)準(zhǔn)的患者共４３例，在取得患者或家屬知情同意后被納入研究，其中３例因經(jīng)濟(jì)原因自動(dòng)出院而被剔除，最終入選患者共４０例。入選患者依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為西醫(yī)常規(guī)治療加復(fù)蘇飲組（治療組）和

5、西醫(yī)常規(guī)治療加安慰劑組（對(duì)照組）各２０例。治療組男１０例，女１０例;年齡最?。玻皻q，最大７５歲，平均（６６.６±4.8）歲;對(duì)照組男１１例，女９例;年齡最?。玻硽q，最大７５歲，平均（６４.８±５.１）歲;APACHEⅡ評(píng)分：治療組為（２３.７１±７.４９）分，對(duì)照組為（２３.８０±６.６０）分。同期在健康體檢者中隨機(jī)抽?。保得栽刚咦鳛檎?duì)照組（正常組），其中男８例，女７例;年齡最小２２歲，最大７０歲，平均（６２.８±６.７）歲。３組在年齡、性別方面均無(wú)顯著性差異（Ｐ＞０.０５)，且治療組和對(duì)照組的APACHEⅡ評(píng)分亦無(wú)顯著性差異（Ｐ＞０.０５),具有可比性。1

6、.１.２診斷標(biāo)準(zhǔn)按照２００１年國(guó)際膿毒癥定義會(huì)議提出的膿毒癥及嚴(yán)重膿毒癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)［１］。1.2治療方法所有入選患者均給予重癥監(jiān)護(hù)、抗炎、營(yíng)養(yǎng)支持、維持血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定、呼吸機(jī)輔助呼吸等西醫(yī)常規(guī)治療。治療組在西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用中藥復(fù)蘇飲（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑室提供，由人工牛黃、西洋參、黃芪、生大黃、生石膏、麥冬、丹參、赤芍、猴棗等組成，諸藥研末分裝膠囊，0.4g/粒），品服或涼開(kāi)水化開(kāi)后鼻飼，每日3次。均給對(duì)照組在西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用安慰劑（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑室提供，由淀粉色素制成，大小、顏色和外包裝與復(fù)蘇飲完全一致），用法同復(fù)蘇飲。兩組

7、均以治療７天為１個(gè)療程，以２８天計(jì)算患者總病死率。1.3實(shí)驗(yàn)方法所有患者被納入研究時(shí)（治療前）、治療第３天、第７天各取外周靜脈血１０mL用于單核細(xì)胞TLR2、TLR4mRNA表達(dá)的檢測(cè)。所有病例在被納入研究期間內(nèi)留取血液、痰液、尿液等標(biāo)本用于細(xì)菌學(xué)檢查。1.3.1單核細(xì)胞的分離患者于被納入研究時(shí)（治療前）、治療第３天、第７天分別取肝素抗凝靜脈血１０mL，與等量Hanks液充分混勻，用淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心法收集單個(gè)核細(xì)胞，然后用RPMT1640(美國(guó)Gibco公司）重懸細(xì)胞，置塑料培養(yǎng)瓶中，于３７℃，體積分?jǐn)?shù)為５％CO2孵箱中溫育２h，所得貼壁細(xì)胞即為單核細(xì)

8、胞，經(jīng)２％