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1、他莫西芬促進HeLa宮頸癌細胞系增殖論文鄒自英，朱運龍，王高峰，鐘延清，周華，劉亞莉【關(guān)鍵詞】宮頸腫瘤【Abstract】AIM：ToinvestigateoxifenisinvolvedintheproliferationofculturedHeLacellline,cervicalcarcinomacelllineofhumanbeings.METHODS：Thelevelofcellproliferationetryandlaserscanningconfocalmicroscope.RESULTS：Tamoxifen(1×10-7molL-1)shif
2、tedthecurveupoxifen(1×10-8~1×10-6molL-1)significantlystimulatedthecellproliferationandfacilitated(1×10-6molL-1)G1/StransferofthecellcycleasoxifenmaymodulatetheproliferationandthedifferentiationofculturedHeLacervicalcarcinomacellsbyaffectingthecellcycleandCa2+inthecells.【Keyoxifen;ce
3、rvixneoplasms;celldivision【摘要】目的：研究他莫西芬（tamoxifen,TAM）對宮頸癌HeLa細胞增殖的影響.方法：應(yīng)用生長曲線測定、MTT、流式細胞術(shù)和激光掃描共聚焦顯微鏡等技術(shù).結(jié)果:TAM（1×107molL1）使HeLa細胞的生長曲線向上移動；TAM（1×108~1×106molL1）可顯著促進HeLa細胞增殖；TAM（1×106molL1）促進細胞G1/S期轉(zhuǎn)化，并顯著促進細胞內(nèi)Ca2+釋放.結(jié)論：TAM可能對子宮頸癌細胞的生長和分化具有重要的調(diào)節(jié)作用,這種調(diào)節(jié)作用可能是通過影響細胞周期和胞內(nèi)Ca2+水平而實現(xiàn)的.【關(guān)鍵
4、詞】他莫昔芬;宮頸腫瘤;細胞分裂0引言他莫西芬（tamoxifen,TAM）既是雌激素的拮抗劑又是其協(xié)同劑，這取決于雌激素受體是激活還是抑制靶基因.例如.freela),MTT(華美生物公司)，二甲基亞砜（Serva公司），furo3/AM(Sigma),酶聯(lián)免疫檢測儀（Beckman）,EliteESP流式細胞儀（Coulter公司），激光掃描共聚焦顯微鏡（BioRad）.1.2方法1.2.1HeLa細胞系培養(yǎng)將HeLa細胞培養(yǎng)于DMEM培養(yǎng)基（DMEM1L中加Hepes3.57g，NaHCO32g），置于37℃，50mLL1CO2培養(yǎng)箱中.培養(yǎng)的HeLa細
5、胞可重疊生長，每3d傳代.傳代時，移去舊培養(yǎng)液，DHank′s液沖洗2次，11加入EDTA和胰酶，消化2.5min，離心后重懸于新培養(yǎng)瓶中，傳代率為12或13.1.2.2生長曲線的測定細胞按常規(guī)傳代方法離心懸浮后，在倒置顯微鏡下用記數(shù)板記數(shù)，調(diào)整細胞數(shù)為1.8×107L1，1mL/孔接種24孔板，在37℃，50mLL1CO2的培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng).從第2日始，每日取3孔細胞進行記數(shù)，取平均值，共記數(shù)7d.記數(shù)到第4日，給未記數(shù)細胞換新培養(yǎng)液.1.2.3MTT比色實驗用含50mLL1小牛血清的DMEM將細胞制成5×107L1的細胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔100
6、μL.實驗設(shè)陰性對照組和各種TAM藥物濃度(1×109,1×108,1×107和1×106molL1)實驗組.每孔加入含50mLL1小牛血清的DMEM配制的藥液100μL，每種藥物濃度8個孔，48h后，每孔加入20μL濃度為5gL1的MTT，37℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)4h，去上清后，每孔加入150μL二甲基亞砜，振蕩器振蕩10min，測A490nm值.1.2.4流式細胞術(shù)細胞等量接種于2個25mL培養(yǎng)瓶，第2日棄舊培養(yǎng)液，加入以含50mLL1小牛血清的DMEM稀釋的TAM（1×106molL1）藥液2mL，37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h后，收集細胞.消化下來的細胞用2.5m
7、LPBS洗滌2次（800~1000rmin1離心,.freelin）,棄上清；加入1mLPBS將細胞混勻，再加入2mL無水乙醇立即振蕩混勻，封口膜封口，4℃冰箱保存?zhèn)溆?送檢時，用PBS洗滌2次，棄除無水乙醇，加100μLPBS將細胞吹散，調(diào)整細胞數(shù)為6×108L1,碘化丙錠染色，用流式細胞儀測定DNA含量，分析用藥后細胞周期的變化.1.2.5細胞內(nèi)鈣的測定將HeLa細胞以2×108L1接種于特制的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)48h，用DHank′s液洗滌2次，在37℃烘箱內(nèi)用furo3/AM(10μmolL1)荷載50min,再用DHank’s液洗滌2次，用共聚焦顯微鏡掃
8、描加TAM前細胞內(nèi)鈣的熒光強度，向培養(yǎng)
