hplc法測定中藥退黃外洗液中梔子苷含量

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1、HPLC法測定中藥退黃外洗液中梔子苷含量[摘要]目的:建立測定中藥退黃外洗液中的梔子苷含量方法。方法:采用高效液相色譜法,色譜柱為島津Shim-packC18(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-水(15:85)為流動相,檢測波長為238nm,流速為1.0ml/min,柱溫為30℃。結果:梔子苷在0.0312～0.936μg范圍呈良好的線性關系,r=0.9997,平均回收率為99.9%,RSD=2.4%。結論:該方法簡便、專屬性好、準確、重現(xiàn)性好,可用于中藥退黃外洗液的質量控制。[關鍵詞]中藥退黃外洗液;梔子苷;HPLC;含量測定[中圖分類號]R28

2、4.1[文獻標識碼]B[文章編號]1674-4721(2009)07(b)-137-02中藥退黃外洗液由梔子、茵陳、大黃、柴胡、郁金、金錢草、車前子等十六味中藥組成。臨床上具有治療或預防新生兒黃疸的作用[1]。方中君藥梔子為瀉火除煩,清熱利尿,涼血解毒藥[2],調查發(fā)現(xiàn),梔子中含有多種的化學成分,如黃酮、環(huán)烯醚萜苷、三萜、有機酸酯,另外還含有D-甘露醇、甾醇、長鏈烷烴、醇、色素及多糖等[3]?！吨袊幍洹?005年版一部“梔子”項下收載有梔子苷的含量測定方法[4],為確保中藥退黃外洗液的療效和質量,擬增加其有效成分梔子苷含量測定方法,作為本品的質量控制指標

3、。51儀器與試藥高效液相色譜儀:Agilent1200,Chemstation工作軟件;乙腈為色譜純試劑,水為重蒸水,其他試劑均為分析純;梔子苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號110749-200613);中藥退黃外洗液(批號:080225,080515,080827)及缺梔子的陰性對照樣品(均由南寧市第一人民醫(yī)院提供)。2方法與條件2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱:Shim-packC18(4.6mm×250mm,5μm);流動相:乙腈-水(15:85);流速:1.0ml/min;檢測波長:238nm;進樣量:10μl,柱溫:30℃,分離度:1.

4、5。理論板數(shù)按梔子苷峰計,應不低于5000。2.2對照品溶液的制備取梔子苷對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每毫升含30μg的溶液,即得。2.3供試品溶液的制備精密量取本品2ml,置100ml容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,即得。2.4陰性對照試驗5取缺梔子的陰性對照溶液,按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。并按上述色譜方法測定,結果表明,陰性對照溶液在與梔子苷對照品相同保留時間處未顯色譜峰,故陰性無干擾。2.5線性關系考察取梔子苷對照品溶液(31.2μg/ml)。精密吸取對照品溶液,1、3、5、10、20、30μl進樣,按上述色譜條件測定梔子苷峰面積

5、,以對照品進樣量(μg)為橫坐標(X),峰面積為縱坐標(Y),得回歸直線方程Y=893.51X+34.78,r=0.9997。結果表明,梔子苷進樣量在0.0312～0.936μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系。2.6重復性試驗取同一批樣品(080225)5份,按正文擬訂的方法測定,測得梔子苷的平均含量為1.08mg/ml,RSD=2.1%(n=5)。2.7穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液(080225),于0、1、2、4、8、12h進樣,結果測定的RSD=1.4%(n=6),試驗表明,在12h內(nèi),供試品溶液穩(wěn)定。2.8精密度試驗取同一供試品溶液(080225)重復進樣5

6、次,測定結果的RSD=0.4%,結果表明精密度理想。2.9加樣回收試驗取經(jīng)測定含量的中藥退黃外洗液(批號:080225)1ml,平行取樣6份,分別精密加入濃度為0.59mg/ml的梔子苷對照品溶液各25ml,按正文擬訂的方法測定。計算加樣回收率。平均回收率為99.9%,RSD=2.4%。2.10樣品的測定吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl,按上述色譜條件進行測定。3討論3.1色譜條件的選擇關于梔子苷在復方中含量測定的研究,有很多報道[5-7],本實驗梔子苷的檢測波長“238nm”,流動相的選擇“乙腈:水(15:85)”均參照中國藥典2005年版一部“梔子

7、”[3]含量測定項下的方法。在該色譜條件下,對照品峰與雜質峰分離較完全。3.2樣品溶液制備方法的選擇本品的制備采用了水提醇沉的方法,由于梔子苷為環(huán)烯醚萜苷,極性較大[8],可以通過水提來提取,而醇沉則使到極性更大的雜質去除掉,故本品供試品溶液制備考慮直接稀釋的方法。實驗結果表明,對照品峰與雜質成分的分離效果較好,峰面積重現(xiàn)性好,加樣回收率較理想,說明該樣品溶液制備方法簡單可行。[參考文獻][1]黃仕孫,高桂娥.中藥退黃外洗液皮膚給藥刺激性試驗[J].兒科藥學雜志,2008,14(1):23-25.5[2]劉瑛,張浩.梔子藥材中梔子苷的含量測定[J].華西藥

8、學雜志,2003,18(5):374-375.[3]趙超,康文藝.