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《發(fā)酵液中替考拉寧含量hplc法測定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、發(fā)酵液中替考拉寧含量HPLC法測定【摘要】目的建立用HPLC法測定替考拉寧含量的方法。方法采用C??18?柱(250mm×4.6mm,5μm)，流動相為0.02mol/L的磷酸緩沖液(pH6.0)?乙腈(75?∶?25)，流速1.0ml/min，檢測波長為254nm，進樣量10μl。結(jié)果替考拉寧在500.0~5000.0μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9988),平均回收率為100.2%(RSD=0.14%,n=6)。結(jié)論方法簡便，結(jié)果準確，適用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。?【關(guān)鍵詞】替考拉寧；HPLC法；含量測定??HPLCdeterminationontheconte
2、ntofTeicoplanininfermentedbrothZHANGBo.AcademyofBasicandForensicMedicine,JiningMedicalUniversity,Jining272067,China?【Abstract】ObjectiveToestablishthedeterminationonthecontentofTeicoplanininfermentedbroth.MethodsAnHPLCmethodwasdeveloped,C??18?column(250mm×4.66mm,5μm)wasused,andthemobileph
3、aseconsistedofphosphatebuffer(pH6.0)andacetonitrile(75：25)attheflowrateof1.0ml/min.Thedetectionwavelengthwas254nm,andtheinjectionvolumewas10μl.ResultsThelinearrangeofTeicoplaninwas500.0~5000.0μg/ml(r=0.9988),andtheaveragerecoverywas100.2%(RSD=0.14%,n=6).ConclusionThismethodisconvenientan
4、daccurate,whichissuitableforthequalitycontrolofthispreparation.?【Keywords】Teicoplanin;HPLC;Contentdetermination?6替考拉寧(Teicoplanin)為新型糖肽類抗生素，抗菌譜及抗菌活性與萬古霉素相似，對金黃色葡萄球菌的作用比萬古霉素更強，不良反應(yīng)更少。本品對革蘭陽性菌如葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌和大多厭氧性革蘭陽性菌敏感，具有較強的殺菌活性。由于替考拉寧獨特的作用機制，很少出現(xiàn)耐替考拉寧的菌株，所以對青霉素類及頭孢菌素類，大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類和氯霉素類，氨基糖苷
5、類和利福平耐藥的革蘭陽性菌，仍對替考拉寧敏感1,2］。本文采用高效液相色譜法，乙腈?磷酸鹽體系作為流動相，對發(fā)酵液中的替考拉寧含量測定方法進行研究，結(jié)果滿意。?1儀器與試劑?Waters1525型液相色譜儀(美國Waters公司)，UV100型紫外檢測器，替考拉寧對照品(中國藥品生物制品檢定所提供)，替考拉寧樣品(山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司)；乙腈(色譜純，天津四友公司)。?2方法與結(jié)果?2.1色譜條件C??18?色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)，流動相為磷酸鹽緩沖液(pH=6.0)?乙腈(75?∶?25)，流速1.0ml/min，檢測波長為254nm,進樣量10
6、μl。?2.2檢測波長的選擇對替考拉寧對照品的流動相溶液進行紫外掃描，結(jié)果在254nm附近有較大吸收，在此波長處發(fā)酵液無明顯干擾，故選擇254nm作為檢測波長。?2.3標準溶液的配制精密稱取替考拉寧對照品約20mg，置10ml容量瓶中，振搖，用流動相溶解至刻度，作為供試品溶液，另取替考拉寧樣品適量，同法操作。?2.4系統(tǒng)適用性試驗取106μl對照品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。在該色譜條件下，替考拉寧峰與其他雜質(zhì)峰分離度大于1.2。?2.5破壞性試驗稱取替考拉寧對照品各約200mg，分別??作者單位：272067濟寧醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院?置于3個100ml容量瓶中
7、，分別加入1mol/L鹽酸、1mol/L氫氧化鈉，3%的過氧化氫溶液各10ml，于室溫放置1h，用流動相定容，作為破壞后的供試品溶液，分別取10μl注入液相色譜儀，結(jié)果替考拉寧與雜質(zhì)分離良好。?2.6線性關(guān)系精密稱取替考拉寧對照品適量，分別制成每1ml中含替考拉寧500.0,1000.0,2000.0,3000.0,4000.0,5000.0μg的溶液，注入液相色譜儀，以替考拉寧峰面積A為縱坐標，濃度C為橫坐標，計算得回歸方程為：?A=487939C，r=0.9988??2.7最低檢測限采用逐級稀釋法，以S/N≥3為最低檢出限，測得最低檢
