hplc法測定紅曲霉發(fā)酵液中洛伐他汀含量

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1、HPLC法測定紅曲霉發(fā)酵液中洛伐他汀含量【摘要】目的建立測定紅曲霉發(fā)酵液中洛伐他汀含量的方法。方法采用HPLC法,以甲醇作溶劑、搖床振蕩(150r/min)3h提取洛伐他汀,色譜條件:以甲醇18mmol/L磷酸溶液(體積比為80∶20)為流動相,流速為1.0mL/min,檢測波長為237nm。結(jié)果洛伐他汀在5~50μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好,加樣平均回收率為100.75%,RSD為0.87%。結(jié)論本方法簡便有效,重復(fù)性好,可作為紅曲霉相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法。【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法;紅曲霉;洛伐他汀  Abstract:ObjectiveToesta

2、blishanHPLCmethodfordeterminingthecontentoflovastatininfermentationbrothofMonascus.MethodLovastatincouldbepletelyextractedfromthefermentationbrothbymethanolundershakingfor3hin.Then,samplesnusingmethanol18mmol/Lphasphate(80∶20)asmobilephaseunderthefloL/min.Thedetection.ResultThemethodhad

3、goodlinearityovertheconcentrationof5~50μg/mLforlovastatin.Theaveragerecoveryethodisconvenient,effectiveandaccurate,pooR低溫高速離心機(德國Sorvall公司),SHZ-82氣浴恒溫振蕩器(江蘇省金壇市宏華儀器廠),十萬分之一電子天平(日本島津)?! ?.2試劑與試藥  洛伐他汀對照品(批號100600-200502,中國藥品生物制品檢定所),95%乙醇(分析純,廣州化學(xué)試劑廠),甲醇(分析純,廣州化學(xué)試劑廠),甲醇(色譜純,英國TEDIA公司)?! ?

4、.3菌株  安卡紅曲霉(Monascusanka)CICC5031,由中國工業(yè)微生物菌種保藏中心保存。  2菌株的培養(yǎng)  將菌株接種在含有馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)4.01%的平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)5d,以活化菌株,然后接種于含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為葡萄糖10%,牛肉浸膏0.5%,(NH4)2SO42.5%,番茄醬5%,CaCO31%,MgSO4·7H2O1%,pH6.5的搖瓶培養(yǎng)基,30℃、150r/min振蕩培養(yǎng)?! ?方法與結(jié)果  3.1色譜條件色譜柱為DikmaDiamonsilC18(4.6mm×250mm;5μm);柱溫30℃;檢測波長237nm;進樣體積10μL,甲醇

5、18mmol/L磷酸(體積比80∶20)為流動相,流速為1.0mL/min。在該條件下,對照品與樣品的色譜圖見圖1?! ?.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制  樣品溶液的制備:取搖瓶培養(yǎng)10d的發(fā)酵液2mL,研磨后加入8mL無水甲醇,150r/min振蕩3h,5000r/min離心10min后取上清,經(jīng)0.22μm濾膜過濾后得到樣品溶液?!   φ掌啡芤旱闹苽洌簻?zhǔn)確稱取洛伐他汀對照品10.0mg,用無水甲醇定容至100mL,經(jīng)0.22μm濾膜過濾后得到100μg/mL對照品溶液?!   ∪∩鲜鰧φ掌啡芤合♂尩玫?,10,20,30,40,50μg/mL的系列溶液,按照所述色譜條件進

6、樣,以峰面積(A)對質(zhì)量濃度(ρ)進行線性回歸,回歸方程為A=44813ρ-1330.6,R2=1.0000,洛伐他汀在5~50μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?! ?.3精密度試驗    取50μg/mL對照品溶液,按上述液相色譜條件,進樣測定5次,結(jié)果峰面積的RSD值為0.56%,表明方法精密度良好?! ?.4重復(fù)性試驗    取同批樣品溶液5份,按“3.2”項方法制備,進樣測定,結(jié)果洛伐他汀平均含量的RSD值為0.82%,表明方法重復(fù)性好?! ?.5穩(wěn)定性試驗  取重復(fù)性試驗中同一濃度樣品溶液室溫下放置,于第0、2、4、8、12h依次測定洛伐他汀含量,結(jié)果其RSD值為

7、0.67%,表明樣品溶液在12h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定?! ?.6回收率試驗    精密量取1mL樣品溶液,置25mL容量瓶中,分別精密加入50μg/mL的對照品溶液0.6、0.8、1.0mL,加無水甲醇稀釋到刻度,在所述的色譜條件下測定。計算回收率,結(jié)果見表1。表1洛伐他汀回收率試驗結(jié)果(略)  4討論    紅曲霉中洛伐他汀提取溶劑有甲醇、乙醇、乙酸乙酯等。本文嘗試用不同溶劑及不同時間進行洛伐他汀提取,結(jié)果表明,用無水甲醇提取3h的提取效果較好?! ≡趯嶒炛邪l(fā)現(xiàn),新配制的洛伐他汀對照品溶液只有一個吸收峰,是酯式的洛伐他汀。但放置2d后,由于洛

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