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1、環(huán)肽的合成方法論文多肽藥物在治療上的重要性，越來越引起廣大藥學工作者的重視。根據(jù)肽鏈的構成可將多肽分為同聚肽（Homomeric）和雜聚肽（Heteromeric）兩大類，前者完全由氨基酸組成，后者是由氨基酸部分和非氨基酸部分組成的，如糖肽。根據(jù)肽鍵的結構又分為直鏈肽和環(huán)肽。其中直鏈肽的研究最為廣泛和深入，尤其在直鏈肽的合成技術方面無論是液相法還是固相法都已成熟。雖然許多直鏈肽體外具有很好的生物活性和穩(wěn)定性，但是進入體內(nèi)后活性很快消失。因為體內(nèi)環(huán)境復雜，存在各種各樣的酶。直鏈肽在酶的作用下很快降解.fr
2、eele126Cyclo(b-Ala-Phe-Pro)的合成中應用了對硝基酚酯法。Boc-b-Ala-Phe-Pro-OH在乙酸乙酯中與1.5摩爾量對硝基酚混合，DCC為縮合劑，得到Boc-b-Ala-Phe-Pro-ONp，經(jīng)TFA脫去Boc，以0.1MNaHCO3和0.1MNa2CO3為堿，二氧六環(huán)為溶劑，室溫反應，得到收率為32的環(huán)三肽27。對硝基酚酯法的優(yōu)點在于對硝基酚價廉易得，缺點是過量的對硝基酚不易完全除去，產(chǎn)物不易純化，顏色發(fā)黃。1.1.2N-羥基琥珀酰亞胺酯法：該方法原理與對硝基酚法一致
3、，唯一不同點在于線性多肽的C端羧基在縮合劑EDC的存在下與N-羥基琥珀酰亞胺（HONSu）縮合，形成直鏈多肽的N-羥基琥珀酰亞胺酯。應用這種方法Toshihisa等在吡啶溶液中合成了cyclo（Pro-Val-Pro-Val）和cyclo（Pro-D-Val-Pro-D-Val），收率分別為15和12。二者為非對映異構體，前者具有植物生長抑制作用，后者卻表現(xiàn)為植物生長促進作用28。1.1.3五氟苯酚酯法：這類活潑酯用于環(huán)肽的合成是近年才發(fā)展起來的。Joullie在合成天然環(huán)肽生物堿SanjoinineG
4、1和其C11位對映異構體時在環(huán)合步驟中就應用了五氟苯酚酯法。首先以D-絲氨酸為原料，經(jīng)多步反應得到環(huán)合前體，用五氟苯酚活化羧基，N端芐氧羰基經(jīng)氫解脫掉后，以4-吡咯烷吡啶為催化劑，在二氧六環(huán)中回流，最終得到兩個互為異構體的混合物，收率分別為27和2229-30，環(huán)合步驟如下圖：另外，海洋生物環(huán)肽PatellamineB以及對纖維蛋白酶和絲氨酸蛋白酶有強烈抑制作用的環(huán)肽CyclotheonamideA的環(huán)合步驟也是應用了五氟苯酯法，收率分別是20和5331。1.2迭氮法在多肽合成中迭氮法是另一種比較經(jīng)典的
5、方法，這種方法的優(yōu)點在于很少引起消旋反應，最早用于直鏈肽的合成，現(xiàn)在常常被用于環(huán)肽的合成32-34。具體方法是，把直鏈肽的甲酯，乙酯，芐酯，取代芐酯或其它更活潑的酯通過肼解的方式生成酰肼，溶于醋酸或鹽酸-醋酸混合溶液，在-5°C左右的溫度下加入1M的亞硝酸鈉溶液，產(chǎn)生的亞硝酸則與酰肼反應生成迭氮物。N端游離的直鏈肽迭氮物于4°C攪拌一天再升溫至室溫，可得環(huán)肽。通式如Scheme4Scheme4.PeptideCyclizationviatheacylazide（X=ZorBoc，R=Me，Et，Bzl）
6、Bodansky最早應用迭氮法合成了cyclo(D-Ala-D-Ala-Val-D-Leu-Ile)，雖然上述環(huán)肽不具有其母體化合物malformin的生物活性，但合成它為應用迭氮法合成環(huán)肽開辟了前景35。應用迭氮法合成環(huán)肽的另一個成功的例子是內(nèi)皮素拮抗劑的合成。Endothelin(ET)是一種高效的血管收縮劑，由21個氨基酸殘基組成36，其受體拮抗劑之一cyclo(D-Trp-D-Asp(OtBu)Fmoc-Ser-D-Val-Leu)的合成過程37如下：DPPA系二苯基磷?；?，是一種穩(wěn)定的
7、液體，沸點157°C，用二苯基磷酰氯和NaN3在丙酮中室溫反應很方便地得到，可以直接用作多肽偶聯(lián)的縮合劑38，近年來多用于環(huán)肽的合成39-41。Arg-Gly-Asp（RGD）是多種細胞外蛋白與整合素相互作用時被整合素識別的關鍵序列，對含有該序列環(huán)肽的合成報道很多42-45。Kessler等用固相合成儀SP650合成了13個含RGD序列的線性六肽和七個含RGD序列的線性五肽，N端和C端均游離的直鏈肽在稀溶液中以DPPA為縮合劑，保持pH8.5~9，反應4天，得到相應的環(huán)六肽和環(huán)五肽，收率在15~50之間
8、。生物活性實驗表明所有的環(huán)六肽對細胞粘附的抑制作用均明顯低于線性肽GRGDS。環(huán)五肽中也只有Cyclo(RGDdFV)和Cyclo(RGDFd-V)對LamininP1的細胞粘附具有明顯的抑制作用46-48。對于某些在堿性條件下易分解的目的物，反應過程當中應用惰性氣體進行保護，例如，線性多肽H-Asp(Fmoc)-d-Ser-Phe-D-Phe-Arg-Gly-OH在無水DMF中，加入5倍量NaHCO3和10倍量DPPA，反應66小時，得到
