蘆薈大黃素苷與dna相互作用的研究論文

《蘆薈大黃素苷與dna相互作用的研究論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、蘆薈大黃素苷與DNA相互作用的研究論文韋欣煜,梅文杰,劉云軍【摘要】目的探討蘆薈大黃素苷與DNA的相互作用。方法采用電子吸收光譜，熒光發(fā)射光譜，粘度實(shí)驗(yàn)以及凝膠電泳實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究。結(jié)果與結(jié)論蘆薈大黃素以插入方式與DNA分子結(jié)合；較高濃度的蘆薈大黃素苷能夠使Bel7402肝癌細(xì)胞DNA由超螺旋構(gòu)型轉(zhuǎn)化為缺刻構(gòu)型?！娟P(guān)鍵詞】蘆薈大黃素苷；分子識(shí)別；凝膠電泳；DNAAbstract:ThebindingpropertiesofbarbalointoDNA,fluorescenceemissionspectrum,viscositymeasurementandgelelectrophoresis,a

2、ndinsertionofbarbalointoDNAacarcinomacellBel7402fromsuperhelixtoindention.Keyolecularrecognition;DNA蘆薈是一種傳統(tǒng)的常用中藥，用于治療如燒傷、燙傷等疾病并被廣泛應(yīng)用于食品和化妝品等行業(yè)，并被。蘆薈大黃素苷(圖1)是蘆薈塊莖的主要成分,異蘆薈大黃素苷是植物中的主要存在形式，通過非酶催化轉(zhuǎn)化為蘆薈大黃素苷，因此通常得到的是蘆薈大黃素苷和異蘆薈大黃素苷的混合物［1，2］。蘆薈的抗菌、抗炎、抗氧化作用等與蘆薈大黃素苷的存在密切相關(guān)［3.freelolecularstructureofbarbaloi

3、nandisobarbaloin近年來的研究表明，蘆薈大黃素具有抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用［7-12］。研究發(fā)現(xiàn)蘆薈大黃素能促進(jìn)人早幼粒HL60白血病細(xì)胞P27基因過度表達(dá)，并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡［13］。一般認(rèn)為DNA是抗腫瘤藥物的靶點(diǎn)之一［14］。藥物分子可以通過共價(jià)結(jié)合、插入作用、溝結(jié)合方式或靜電結(jié)合方式與DNA分子締合，對(duì)DNA的構(gòu)象產(chǎn)生微擾，達(dá)到抑制腫瘤生長的目的。本文采用熒光光譜和流體力學(xué)方法研究了蘆薈大黃素苷與DNA分子的締合機(jī)理。結(jié)果表明蘆薈大黃素苷能夠以插入方式與DNA分子結(jié)合；凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，光照下蘆薈大黃素苷能夠使Bel7402肝癌細(xì)胞DNA的超螺旋構(gòu)型發(fā)生一定程度的

4、轉(zhuǎn)化。1實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器與試劑蘆薈大黃素苷由中山大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院陸偉剛博士提供;Bel7402肝癌細(xì)胞由中山大學(xué)腫瘤研究所提供。所用化學(xué)試劑均為分析純，除非另有說明，所有試劑未作任何處理。蘆薈大黃素苷用5mmol/LTrisHCl,50mmol/LNaCl(pH=7.2)緩沖溶液配制。小牛胸腺DNA（華美公司）；電泳級(jí)瓊脂糖（Promega公司）。MPS2000型紫外可見光譜計(jì)（Shimadzu）；RF2000型熒光分光光度計(jì)（Shimadzu）；烏氏粘度計(jì)；DYYⅢ4型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀（北京六一儀器廠）。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1Bel7402肝癌細(xì)胞的提取按文獻(xiàn)方法［1

5、5］進(jìn)行：收集培養(yǎng)好的Bel7402腫瘤細(xì)胞，以磷酸鹽緩沖液洗滌,14000r/min離心5min，收集底部白色固體沉淀，重復(fù)3次,加入RNaseA（20mg/mL）50μL和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的SDS20μL，56℃孵育2h,然后加入蛋白酶K（20mg/mL）35μL，37℃孵育24h,加入10mol/LNH4OAc150μL和無水乙醇1.2mL，20℃過夜，得到DNA的溶液，離心、干燥后，將DNA溶解在150μLTrisHCl緩沖溶液中。1.2.2紫外-可見吸收光譜實(shí)驗(yàn)在參比池和樣品池中分別加入等量的DNA以消除DNA本身的吸收，當(dāng)蘆薈大黃素苷的電子吸收光譜不再變化，此時(shí)吸收滴定達(dá)到飽

6、和。1.2.3熒光光譜實(shí)驗(yàn)在樣品池中加入一定體積的蘆薈大黃素苷溶液，每次往池中加入一定體積的DNA，直至熒光光譜不再變化。1.2.4粘度實(shí)驗(yàn)在(25±0.1)℃恒溫水浴中使用烏氏粘度計(jì)測量。DNA的流出時(shí)間用數(shù)字秒表測量得到，每個(gè)樣品測量3次，取3次測量的平均值，以(η/η0)1/3蘆薈大黃素苷的濃度作圖［16］。η=t-t0η:DNA的粘度；t:DNA溶液的流出時(shí)間；t0:緩沖溶液的流出時(shí)間；η0:沒有加入蘆薈大黃素苷時(shí)DNA的粘度。1.2.5電泳實(shí)驗(yàn)TBE緩沖溶液中、1％的瓊脂糖凝膠上進(jìn)行，電泳電壓30V，電泳40min，溴乙錠染色，照相。2結(jié)果與討論2.1DNA對(duì)蘆薈大黃素苷電子吸收光

7、譜的影響電子吸收光譜是研究小分子化合物與生物大分子相互作用的常用方法之一。室溫下TrisHCl(pH=7.2)緩沖溶液中，蘆薈大黃素苷在300～400nm之間有一個(gè)強(qiáng)的ππ*躍遷，其電子吸收峰的最大值為359nm。當(dāng)向溶液中加入小牛胸腺DNA以后，蘆薈大黃素苷的電子吸收光譜出現(xiàn)明顯減色效應(yīng)，其電子吸收降低約5％(Δλ＝1nm)，見圖2。圖2蘆薈大黃素苷與DNA作用的紫外可見光譜變化圖（略）Fig.2The