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1、蘆薈大黃素昔及DNA相互作用探究;;作者：韋欣煜，梅文杰,劉云軍【摘要】；目的探討蘆薈大黃素昔與DNA的相互作用。方法采用電子吸收光譜，熒光發(fā)射光譜，粘度實驗以及凝膠電泳實驗進行研究。結(jié)果與結(jié)論蘆薈大黃素以插入方式與DNA分子結(jié)合；較高濃度的蘆薈大黃素昔能夠使Bel7402肝癌細胞DNA由超螺旋構(gòu)型轉(zhuǎn)化為缺刻構(gòu)型。【關(guān)鍵詞】；蘆薈大黃素昔；分子識別；凝膠電泳；DNAAbstract:ThebindingpropertiesofbarbalointoDNAwereinvestigatedbyUVvis
2、ibleelectronabsorptionspectrum,fluorescenceemissionspectrum,viscositymeasurementandgelelectrophoresis,andinsertionofbarbalointoDNAwasidentified.HigherconcentrationofbarbaloincouldconvertDNAconfigurationofhepatomacarcinomacellBel7402fromsuperhelixtoinde
3、ntion.Keywords:barbaloin;molecularrecognition;DNA蘆薈是一種傳統(tǒng)的常用中藥，用于治療如燒傷、燙傷等疾病并被廣泛應用于食品和化妝品等行業(yè)，并被。蘆薈大黃素昔（圖1）是蘆薈塊莖的主要成分，異蘆薈大黃素昔是植物中的主要存在形式，通過非酶催化轉(zhuǎn)化為蘆薈大黃素昔，因此通常得到的是蘆薈大黃素昔和異蘆薈大黃素昔的混合物[1,2]o蘆薈的抗菌、抗炎、抗氧化作用等與蘆薈大黃素昔的存在密切相關(guān)[3,4Jo在生物體內(nèi)蘆薈大黃素昔通過代謝轉(zhuǎn)化為蘆薈大黃素而發(fā)揮藥理作用[5,6
4、L圖1;蘆薈大黃素昔和異蘆薈大黃素昔的分子結(jié)構(gòu)（略）Fig.1;Themolecularstructureofbarbaloinandisobarbaloin近年來的研究表明，蘆薈大黃素具有抑制腫瘤細胞生長的作用[7-12]o研究發(fā)現(xiàn)蘆薈大黃素能促進人早幼粒HL60白血病細胞P27基因過度表達，并誘導腫瘤細胞凋亡[13]□—般認為DNA是抗腫瘤藥物的靶點之一[14]□藥物分子可以通過共價結(jié)合、插入作用、溝結(jié)合方式或靜電結(jié)合方式與DNA分子締合，對DNA的構(gòu)象產(chǎn)生微擾，達到抑制腫瘤生長的目的。本文采用
5、熒光光譜和流體力學方法研究了蘆薈大黃素昔與DNA分子的締合機理。結(jié)果表明蘆薈大黃素昔能夠以插入方式與DNA分子結(jié)合；凝膠電泳實驗結(jié)果表明，光照下蘆薈大黃素昔能夠使Bel7402肝癌細胞DNA的超螺旋構(gòu)型發(fā)生一定程度的轉(zhuǎn)化。1;實驗部分1.1;儀器與試劑蘆薈大黃素昔由中山大學化學與化學工程學院陸偉剛博士提供;Bel7402肝癌細胞由中山大學腫瘤研究所提供。所用化學試劑均為分析純，除非另有說明，所有試劑未作任何處理。蘆薈大黃素昔用5mmol/LTrisHCI,50mmol/LNaCI(pH=7.2)緩沖
6、溶液配制。小牛胸腺DNA(華美公司)；電泳級瓊脂糖(Promega公司MPS2000型紫外可見光譜計(Shimadzu);RF2000型熒光分光光度計(Shimadzu);烏氏粘度計；DYY山4型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(北京六一儀器廠L1.2;實驗方法1.2.1;Bel7402肝癌細胞的提取按文獻方法［15］進行：收集培養(yǎng)好的Bel7402腫瘤細胞，以磷酸鹽緩沖液洗滌,14000r/min離心5min，收集底部白色固體沉淀，重復3次，加入RNaseA(20mg/mL)50pL和質(zhì)量分數(shù)為10%的SDS20
7、
8、JL,56°C孵育2h,然后加入蛋白酶K(20mg/mL)35pL,37°C孵育24h,加入10mol/LNH4OAc150pL和無水乙醇1.2mL,20°C過夜，得到DNA的溶液,離心、干燥后,將DNA溶解在150pLTrisHCI緩沖溶液中。1.2.2;紫外-可見吸收光譜實驗在參比池和樣品池中分別加入等量的DNA以消除DNA本身的吸收，當蘆薈大黃素昔的電子吸收光譜不再變化，此時吸收滴定達到飽和。1.2.3;熒光光譜實驗在樣品池中加入一定體積的蘆薈大黃素昔溶液，每次往池中加入一定體積的DNA,直
9、至熒光光譜不再變化。1.2.4;粘度實驗在(25±0.1)°C恒溫水浴中使用烏氏粘度計測量。DNA的流出時間用數(shù)字秒表測量得到，每個樣品測量3次，取3次測量的平均值，以(q/n0)1/3蘆薈大黃素昔的濃度作圖[16Jor
10、=t-t0q：DNA的粘度；t:DNA溶液的流出時間；t0:緩沖溶》的流岀時間；口0:沒有加入蘆薈大黃素昔時DNA的粘度。1.2.5;電泳實驗TBE緩沖溶液中、1%的瓊脂糖凝膠上進行，電泳電壓30V,電泳40min,漠乙錠染色，照相。2;結(jié)果與討論2
