資源描述：
《病原生物學(xué)專業(yè)優(yōu)秀論文 人腺病毒的分離鑒定和松針油抗腺病毒作用機(jī)制研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、【精品】畢業(yè)論文優(yōu)秀畢業(yè)論文本科論文專業(yè)學(xué)術(shù)論文參考文獻(xiàn)資料病原生物學(xué)專業(yè)優(yōu)秀論文人腺病毒的分離鑒定和松針油抗腺病毒作用機(jī)制研究關(guān)鍵詞：腺病毒培養(yǎng)鑒定序列比對鑒定抗病毒活性松針油克隆測序摘要：腺病毒是一種無包膜的雙鏈DNA病毒，人腺病毒有六組51個血清型，能引起人不同器官的多種疾病。在正常人群中，腺病毒感染能引起呼吸道疾病、結(jié)膜炎、胃腸炎、出血性膀胱炎，個別可發(fā)生肝炎、心肌炎、腦膜炎、腎炎等。在骨髓移植患兒中，由腺病毒誘發(fā)的死亡率高達(dá)50-80％。目前尚無有效的抗腺病毒治療藥物，因而開展防治腺病毒感染的研究具有重要的意義。為了解哈爾濱地
2、區(qū)腺病毒的流行狀況，開展有關(guān)腺病毒感染流行病學(xué)、病原學(xué)等研究，以及為建立合適的防治策略，本文收集了哈爾濱地區(qū)兒童呼吸道感染患者的咽拭子標(biāo)本(2005年11月到2006年3月)，對其進(jìn)行了病毒的分離鑒定，并對松針油及其單體的抗腺病毒作用的機(jī)理進(jìn)行了研究。將臨床采集的咽拭子標(biāo)本接種于HeLa細(xì)胞進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)，對致細(xì)胞病變陽性的標(biāo)本用腺病毒屬特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增腺病毒核酸，初步鑒定病毒種類。進(jìn)而，用超薄切片透射電鏡觀察病毒形態(tài)、免疫熒光方法檢測病毒抗原，以及對PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆測序和序列比對鑒定。病毒分離鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：(1)對32
3、例標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒，有14例(43.7％)標(biāo)本接種后出現(xiàn)細(xì)胞病變。(2)用腺病毒特異性通用引物進(jìn)行特異性PCR擴(kuò)增，結(jié)果有1例(57號標(biāo)本)CPE陽性細(xì)胞標(biāo)本出現(xiàn)了預(yù)期擴(kuò)增條帶。(3)電鏡結(jié)果顯示該例PCR擴(kuò)增陽性標(biāo)本中有晶格狀排列的腺病毒樣顆粒。(4)用腺病毒六鄰體單克隆抗體，對該例PCR擴(kuò)增陽性細(xì)胞中的病毒抗原進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞標(biāo)本中均有清晰的熒光標(biāo)記信號存在：同時中和試驗(yàn)結(jié)果表明腺病毒六鄰體抗體可中和57號標(biāo)本的病毒，中和抗體效價為1：1024。(5)將PCR陽性產(chǎn)物克隆到pQE31載體上進(jìn)行序列測定，并與GetaBa
4、nk發(fā)表的序列相比較，發(fā)現(xiàn)該標(biāo)本與腺病毒7型最為接近，六鄰體核苷酸同源性為99.2％，氨基酸同源性為99.3％。為開發(fā)抗腺病毒藥物，本文用水蒸氣蒸餾法提取松針油，氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀分析松針油成分，選出松針油中含量豐富的單體進(jìn)行抗病毒機(jī)理研究。采用細(xì)胞病變抑制實(shí)驗(yàn)和噻唑藍(lán)(MTT)比色法觀察松針油及單體α-蒎烯、β-蒎烯和檸檬烯對人腺病毒3型的抑制作用。同時利用原子力顯微鏡觀察病毒與藥物直接作用后病毒形態(tài)學(xué)的改變：用激光共聚焦顯微鏡檢測藥物在吸附階段對病毒的作用效果。松針油抗腺病毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：(1)MTT結(jié)果顯示松針油、β-蒎烯和檸檬
5、烯抗腺病毒的作用方式主要為對病毒的直接滅活作用、在病毒的吸附階段抑制病毒吸附以及在病毒的生物合成階段抑制病毒的復(fù)制。但這三種藥物均對細(xì)胞無保護(hù)作用，不能阻斷病毒進(jìn)入細(xì)胞。(2)α-蒎烯對病毒的抑制作用主要表現(xiàn)在對病毒的直接滅活作用和對細(xì)胞的保護(hù)作用，從而阻擋病毒進(jìn)入細(xì)胞。(3)原子力顯微鏡觀察結(jié)果顯示松針油及單體對ADV3發(fā)揮直接滅活作用時，可以破壞病毒的結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)為病毒體積變小，表面不光滑，形態(tài)不規(guī)則，從而進(jìn)一步證明藥物在直接滅活方式上對病毒的抑制作用?！揪贰慨厴I(yè)論文優(yōu)秀畢業(yè)論文本科論文專業(yè)學(xué)術(shù)論文參考文獻(xiàn)資料病原生物學(xué)專業(yè)優(yōu)秀論文
6、人腺病毒的分離鑒定和松針油抗腺病毒作用機(jī)制研究關(guān)鍵詞：腺病毒培養(yǎng)鑒定序列比對鑒定抗病毒活性松針油克隆測序摘要：腺病毒是一種無包膜的雙鏈DNA病毒，人腺病毒有六組51個血清型，能引起人不同器官的多種疾病。在正常人群中，腺病毒感染能引起呼吸道疾病、結(jié)膜炎、胃腸炎、出血性膀胱炎，個別可發(fā)生肝炎、心肌炎、腦膜炎、腎炎等。在骨髓移植患兒中，由腺病毒誘發(fā)的死亡率高達(dá)50-80％。目前尚無有效的抗腺病毒治療藥物，因而開展防治腺病毒感染的研究具有重要的意義。為了解哈爾濱地區(qū)腺病毒的流行狀況，開展有關(guān)腺病毒感染流行病學(xué)、病原學(xué)等研究，以及為建立合適的防治
7、策略，本文收集了哈爾濱地區(qū)兒童呼吸道感染患者的咽拭子標(biāo)本(2005年11月到2006年3月)，對其進(jìn)行了病毒的分離鑒定，并對松針油及其單體的抗腺病毒作用的機(jī)理進(jìn)行了研究。將臨床采集的咽拭子標(biāo)本接種于HeLa細(xì)胞進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)，對致細(xì)胞病變陽性的標(biāo)本用腺病毒屬特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增腺病毒核酸，初步鑒定病毒種類。進(jìn)而，用超薄切片透射電鏡觀察病毒形態(tài)、免疫熒光方法檢測病毒抗原，以及對PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆測序和序列比對鑒定。病毒分離鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：(1)對32例標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒，有14例(43.7％)標(biāo)本接種后出現(xiàn)細(xì)胞病變。(2)用
8、腺病毒特異性通用引物進(jìn)行特異性PCR擴(kuò)增，結(jié)果有1例(57號標(biāo)本)CPE陽性細(xì)胞標(biāo)本出現(xiàn)了預(yù)期擴(kuò)增條帶。(3)電鏡結(jié)果顯示該例PCR擴(kuò)增陽性標(biāo)本中有晶格狀排列的腺病毒樣顆粒。(4)用腺病毒六鄰體單克隆抗體，
