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1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文Ⅰ群禽腺病毒山東株的分離鑒定及其致病性研究姓名：國(guó)紀(jì)壘申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：刁有祥20120615山東農(nóng)業(yè)入學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要雞包含體肝炎(Inclusionbodyhepatitis，IBH)是由I群禽腺病毒(FowlAdenovirus．I，F(xiàn)AV-I)的某些血清型引起的以侵害肝臟為主并在肝細(xì)胞中形成核內(nèi)包含體為特征的傳染病。本病于1963年首次在美國(guó)發(fā)生，隨后在世界各地相繼出現(xiàn)。1976年我國(guó)臺(tái)灣省首次發(fā)生本病，之后全國(guó)各地均有發(fā)生本病的報(bào)道。
2、山東省自1988年首次報(bào)道本病的發(fā)生以來(lái)，幾乎每年都有該病的發(fā)生。禽腺病毒能夠引起免疫抑制，造成機(jī)體對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答失敗，給肉雞養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的危害。國(guó)內(nèi)已經(jīng)分離到血清1型、血清2型和血清8型的ⅣMI。為探明FAV-I在山東地區(qū)的血清型分布、感染情況及其致病性，本課題從山東省不同地區(qū)疑似包含體肝炎的商品肉雞中進(jìn)行FAV．I的分離，應(yīng)用PCR方法對(duì)分離毒株hexon基因進(jìn)行擴(kuò)增；應(yīng)用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(AGP)對(duì)分離毒株的血清型進(jìn)行鑒定。結(jié)果在山東地區(qū)共分離到8株FAV．I。所有分離毒株均符合FAV．I的理
3、化特性且均能擴(kuò)增到特異的目的片段；8株FAV。1分離毒株可分為3個(gè)血清型，其中血清2型1株，血清8型4株，血清lO型3株。選擇l株血清10型FAV．1分離毒株通過(guò)皮下注射接種途徑人工感染SPF雛雞，同時(shí)設(shè)對(duì)照組。逐同觀察雞只的發(fā)病情況及癥狀；于感染后不同時(shí)間隨機(jī)剖殺試驗(yàn)組和對(duì)照組雞只，采集心臟、肝臟、肺臟和腸道等器官固定、切片、H．E．染色，觀察各器官病理組織學(xué)變化，并進(jìn)行血常規(guī)和血液生化指標(biāo)檢測(cè)。FAV．I接種后，引起雛雞精神沉郁、食欲不振、嗜睡等癥狀；病理組織學(xué)變化以肝臟脂肪變性、肝臟組織結(jié)構(gòu)紊
4、亂、肝竇間出血和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)并在肝細(xì)胞核內(nèi)可見(jiàn)嗜堿性包含體為主；腸道內(nèi)腸絨毛脫落；肺臟廣泛性出血和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)為特征：HGB、WBC、RBC、ALT、ALP、TP和BUN發(fā)生顯著變化。將FAV．I不同血清型的參考毒株濃縮，經(jīng)l‰的甲醛滅活36h后免疫清潔級(jí)新西蘭白兔，高免血清經(jīng)辛酸．硫酸銨法和葡聚糖G200柱純化，制得第一抗體。以FITC標(biāo)記的山羊抗兔IgG為第二抗體。通過(guò)反應(yīng)條件的優(yōu)化，建立了FAV．I間接免疫熒光(IFA)快速診斷方法。試驗(yàn)結(jié)果表明：一抗的最佳稀釋度為l：25，感作時(shí)問(wèn)為4。C過(guò)
5、夜，二抗的最佳工作濃度為l：200，感作時(shí)間為37。Clh，F(xiàn)AV．I特異性黃綠色熒光最清晰。應(yīng)用建立的IFA對(duì)FAV-1人工感染雛雞的各組織器官進(jìn)行檢測(cè)，肝臟、脾臟、腸道、肺臟均可檢測(cè)到FAV．I，其中肝臟和腸道檢出率最高，表明這兩個(gè)器官是FAV．I的主要靶器官。研究表明本法用于FAV．I的診斷具有簡(jiǎn)單、快速、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，是對(duì)FAV—I進(jìn)行I群禽腺病毒山東株的分離鑒定及其致病性研究檢測(cè)和抗原定位的良好方法。關(guān)鍵詞：I群禽腺病毒；分離鑒定；血清型；致病性；間接免疫熒光；抗原定位山東農(nóng)業(yè)人學(xué)碩七學(xué)
6、位論文AbstractInclusionbodyhepatitis(IBH)istodisoperatetheliversandformintranuclearinclusioninthelix7ercellscausedbysomeserotypesofFowlAdenovirus．I(FAV—I)．Itwasfirstdetectedinthe1963inAmericaandisnowwidelydistributedinmanycountriesworldwide．Itwasfirstdesc
7、ribedinTaiwanin1976．SubsequentlythereportoflBHincreasedgradually．ThisdiseasewasfirstlyreportedinShandongprovince，Chinain1988，andprevailseveryyear．FowlAdenovirus—Icancausesevereimmunesuppressionwhichresultsinpoororfailureoftheimmuneeffects，andcausessubs
8、tantiallossinthepoultryindustry．SerotypeI，serotypeIIandserotypeVIIIofFAV—1wereisolatedinChina．Inthisstudy，F(xiàn)AV—1wasisolatedfromsuspectedinfectioninShandongprovince．SerotypesofisolatedIBHstrainsweredeterminedbychickembryopathologicalchang
