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1、他莫昔芬對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株增殖的影響【摘要】目的探討他莫昔芬（Tamoxifen,TAM）對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞體外增殖的影響。方法應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法研究他莫昔芬對(duì)Ishikawa細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果TAM濃度為1×10-8～1×10-6mol/Ｌ時(shí),呈劑量依賴性促進(jìn)Ishikawa細(xì)胞的增殖，TAM濃度為1×10-5mol/Ｌ時(shí),可抑制細(xì)胞的增殖。而且這種促進(jìn)作用呈現(xiàn)劑量—時(shí)間—效應(yīng)關(guān)系。結(jié)論低濃度的TAM具有促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa細(xì)胞增殖的作用?！娟P(guān)鍵詞】他莫昔芬Ishikawa細(xì)胞培養(yǎng)TheEffectonProliferation
2、ofHumanEndometrialCarcinomaCellbyTamoxifenYANGYi1,XUEXiao-ou2(1.LiaoningMedicalUniversity,Jinzhou121001China；2.TheAffiliatedDongfangHospitalofBeijingTraditionalMedicalUniversity,Beijing100078China)【Abstract】ObjectiveToexploretheproliferationofhumanendometrialcarcinomacellIshikawabytamoxifenin
3、vitro.MethodsMTTassaywasadoptedtodeterminetheproliferationinducedbyTAM.ResultsAtlowerconcentration(1×10-8～1×10-6mol/Ｌ),Tamoxifenstimulatedtheproliferationofhumanendometrialcarcinomacell.Whileathigherconcentration(1×10-8mol/Ｌ),tamoxifenrestraintheproliferation.Thedoseandtimed
4、ependenteffectcanbefoundinthisexperiment.ConclusionsTamoxifencanstimulatetheproliferationofhumanendometrialcarcinomacelllineatlowerconcentration.【Keywords】tamoxifen;Ishikawa;cellculture20世紀(jì)80年代開始，他莫昔芬廣泛地用于雌激素受體陽性的早期乳腺癌術(shù)后的輔助治療?，F(xiàn)已明確,TAM在乳腺組織中發(fā)揮雌激素受體拮抗劑的作用,但在子宮內(nèi)膜、肝、骨等組織中發(fā)揮雌激素樣作用,這種差別的機(jī)理尚不清楚。但越來越
5、多的研究發(fā)現(xiàn),乳癌術(shù)后長期應(yīng)用TAM可以引起子宮良性病變(內(nèi)膜息肉、內(nèi)膜增生或子宮肌瘤增大等)甚或子宮內(nèi)膜癌。本實(shí)驗(yàn)研究TAM對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株生長的影響。對(duì)TAM的作用及機(jī)制進(jìn)行了初步的探討，以期從理論上證實(shí)臨床上利用TAM治療乳腺癌時(shí)可能會(huì)引起子宮內(nèi)膜的病變。1材料與方法1.1材料人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa細(xì)胞株由北大人民醫(yī)院惠贈(zèng)，他莫昔芬、四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)、二甲基亞砜（DMSO）購于Sigma公司，RPMI-1640培養(yǎng)基為美國Gibco公司產(chǎn)品，胎牛血清為杭州四季青血清。胰酶和EDTA均購于Ameresco公司。將TAM溶解在無水乙醇中，配成1×
6、;10－3mol/L的儲(chǔ)備液，放入-20℃冰箱備用，實(shí)驗(yàn)時(shí)用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基稀釋，使無水乙醇的終濃度在0.1%以下，預(yù)實(shí)驗(yàn)表明含終濃度0.1%的乙醇培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞生長無明顯影響。1.2細(xì)胞培養(yǎng)Ishikawa細(xì)胞使用含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，在37.0℃、5％CO2中培養(yǎng)。細(xì)胞可貼壁生長，待細(xì)胞貼滿底壁的80％左右時(shí)傳代。傳代時(shí)，移去舊培養(yǎng)液，PBS液沖洗2次，用0.25%胰酶和0.02％EDTA的混合消化液消化，培養(yǎng)液重懸細(xì)胞于新培養(yǎng)瓶中，傳代率為1∶2或1∶3。1.3細(xì)胞生長曲線細(xì)胞按常規(guī)傳代方法離心懸浮后，在倒置顯微鏡下用記數(shù)板記數(shù)，
7、調(diào)整細(xì)胞密度為1×105/mL，以每個(gè)皿1mL的量接種于直徑為35mm培養(yǎng)皿，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。以接種當(dāng)日為0d,自次日起,每天定點(diǎn)取細(xì)胞各3瓶,進(jìn)行消化、收獲、計(jì)數(shù),取其平均值繪制生長曲線,連續(xù)測7d。按接種后第1天的平均細(xì)胞數(shù)/接種的細(xì)胞數(shù),計(jì)算細(xì)胞的貼壁率。1.4MTT比色量效實(shí)驗(yàn)按上述培養(yǎng)方法得到的Ishikawa單細(xì)胞懸液,調(diào)整細(xì)胞密度為5×104/mL，在96孔培養(yǎng)板中每孔加入懸液180μL,置于37.0℃、5％CO2培
