發(fā)光免疫檢測技術(shù)的臨床應(yīng)用

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1、由于化學(xué)反應(yīng)（通常是氧化）產(chǎn)生電子能級(jí)處于激發(fā)態(tài)的物質(zhì)，后者通過躍遷釋放能量產(chǎn)生光子，從而導(dǎo)致的發(fā)光現(xiàn)象。生物發(fā)光和化學(xué)發(fā)光均屬于冷光，即發(fā)光不是由于發(fā)光體溫度升高所至，發(fā)射波長也與其溫度無關(guān)。分類：按化學(xué)反應(yīng)類型酶促化學(xué)發(fā)光：辣根過氧化物酶系統(tǒng)堿性磷酸酶系統(tǒng)黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)非酶促化學(xué)發(fā)光：吖啶酯系統(tǒng)草酸酯系統(tǒng)三價(jià)鐵-魯米諾系統(tǒng)按發(fā)光持續(xù)時(shí)間閃光（Flash）:發(fā)光時(shí)間在數(shù)秒內(nèi)，如吖啶酯以原位進(jìn)樣(InSituInjector)和時(shí)間積分法測量輝光（Glow）:發(fā)光時(shí)間在數(shù)十分鐘以上，如：HRP-Luminol系統(tǒng)AP-AM

2、PPD系統(tǒng)黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)無須原位進(jìn)樣、以速率法測量。輝光和閃光區(qū)別：光生物學(xué)檢測技術(shù)的優(yōu)越性:1、徹底消除了放射性危害2、無半衰期限制，試劑穩(wěn)定性和有效期大大延長3、容易實(shí)現(xiàn)連續(xù)、動(dòng)態(tài)、重復(fù)測定4、適合于復(fù)合標(biāo)記系統(tǒng)進(jìn)行多指標(biāo)并行測定5、操作簡單，反應(yīng)速度快，容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化6、靈敏度和線性范圍超過以往技術(shù)幾種標(biāo)記/檢測技術(shù)靈敏度的比較幾種標(biāo)記/檢測技術(shù)線性范圍的比較幾種標(biāo)記/檢測試劑的有效期比較三種免疫測定技術(shù)的成本及費(fèi)用免疫分析技術(shù)基本原理：利用抗原、抗體之間的特異性結(jié)合來測定、分析特定物質(zhì)的方法抗原：可誘導(dǎo)動(dòng)物免疫系統(tǒng)

3、產(chǎn)生免疫應(yīng)答的物質(zhì)。抗體：由動(dòng)物免疫系統(tǒng)產(chǎn)生，可特異性結(jié)合某種物質(zhì)的球蛋白。免疫測定技術(shù)分類雙抗體夾心法（三明志法）原理夾心法的劑量--反應(yīng)關(guān)系曲線競爭法的原理競爭法的劑量--反應(yīng)關(guān)系曲線間接法原理俘獲法原理雙抗原夾心法原理間接包被夾心法原理發(fā)光免疫分析基本操作步驟（一步法）發(fā)光免疫分析基本操作步驟（二步法）免疫分析結(jié)果的干擾因素免疫源性胰島素與真胰島素、HCG、性激素等采用不同的單抗或多抗時(shí)檢測結(jié)果也有較大差異。（單抗特異性好，受干擾小，因此測值低），不同廠家產(chǎn)品測定結(jié)果之間一致性差（未與國家標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)）。所使用的內(nèi)建標(biāo)準(zhǔn)

4、曲線結(jié)合校正的方法不盡完善。部分產(chǎn)品不顯示原始數(shù)據(jù)，無法監(jiān)控其準(zhǔn)確性。使用商品化發(fā)光免疫分析產(chǎn)品必須做好的幾個(gè)工作在廠家提供的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)上，自行建立正常參考值系統(tǒng)。明確各個(gè)試劑盒的特異性及交叉反應(yīng)情況，如：小分子激素之間，以及與自身前體或代謝物之間的交叉胰島素與C-肽、胰島素原之間的交叉FSH、LH、HCG之間的交叉。充分利用現(xiàn)有國標(biāo)參考品校正結(jié)果（注意防腐劑干擾）（可以從國家藥品生物制品檢定所或臨床檢驗(yàn)中心得到）自行建立多點(diǎn)質(zhì)控（2-3點(diǎn)）監(jiān)控每次實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。盡可能避免干擾因素。①、采樣：清潔樣品管（防止還原劑干擾）、不使

5、用酶抑制劑、及時(shí)送檢；②、實(shí)驗(yàn)室：恒溫、避免強(qiáng)光和強(qiáng)磁場、嚴(yán)格操作規(guī)程、及時(shí)維護(hù)、報(bào)修。正常值參考的意義及灰色區(qū)域的存在自身基礎(chǔ)數(shù)據(jù)——最佳“正常參考值”檢驗(yàn)醫(yī)師給臨床所提供的一切服務(wù)僅限于：①保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的；②對(duì)該檢驗(yàn)項(xiàng)目或其檢驗(yàn)結(jié)果普遍意義的解釋；③建立和完善實(shí)驗(yàn)室面向臨床大夫乃至患者的咨詢制度；④不要試圖替臨床大夫?yàn)槟骋痪唧w病例作出最終診斷。化驗(yàn)結(jié)果與臨床不符的原因。