發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)的臨床應(yīng)用

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1、發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)的臨床應(yīng)用及其應(yīng)注意的問(wèn)題楊曉林　博士北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部研究員中國(guó)生物物理學(xué)會(huì)光生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)副主任委員國(guó)際生物發(fā)光和化學(xué)發(fā)光學(xué)會(huì)(ISBC）學(xué)術(shù)理事CouncilmemberofscientificadvisoryboardofInternationalSocietyonBioluminescence&Chemiluminescence由于化學(xué)反應(yīng)（通常是氧化）產(chǎn)生電子能級(jí)處于激發(fā)態(tài)的物質(zhì)，后者通過(guò)躍遷釋放能量產(chǎn)生光子，從而導(dǎo)致的發(fā)光現(xiàn)象。化學(xué)發(fā)光（Chemiluminescence）生物發(fā)光和化學(xué)發(fā)光均屬于冷光，即發(fā)光不是由于發(fā)光體溫度升高所至，發(fā)射波長(zhǎng)也與其溫度無(wú)

2、關(guān)按化學(xué)反應(yīng)類型化學(xué)發(fā)光的分類酶促化學(xué)發(fā)光：辣根過(guò)氧化物酶系統(tǒng)堿性磷酸酶系統(tǒng)黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)非酶促化學(xué)發(fā)光：吖啶酯系統(tǒng)草酸酯系統(tǒng)三價(jià)鐵-魯米諾系統(tǒng)閃光（Flash）:按發(fā)光持續(xù)時(shí)間發(fā)光時(shí)間在數(shù)十分鐘以上，如：HRP-Luminol系統(tǒng)AP-AMPPD系統(tǒng)黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)無(wú)須原位進(jìn)樣、以速率法測(cè)量。發(fā)光時(shí)間在數(shù)秒內(nèi)，如吖啶酯以原位進(jìn)樣(InSituInjector)和時(shí)間積分法測(cè)量輝光（Glow）:時(shí)間發(fā)光信號(hào)輝光坪區(qū)速率法測(cè)量原位進(jìn)樣積分法測(cè)量閃光尖峰閃光與輝光及其測(cè)量方式的差別魯米諾及其衍生物的增敏化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)H2O2+NH2OONHNHN2OH-HRPNH2CO2-CO2-+Pho

3、ton(425nm)ROHROHNSRBOHOH增強(qiáng)劑（Enhancer）商業(yè)化產(chǎn)品中常見(jiàn)的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)AMPPD及其衍生物的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)+*光子(477nm)APOOOCH3OPO32-O-OOOCH3OO-OOCH3商業(yè)化產(chǎn)品中常見(jiàn)的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)CH3C=OORN+OH-H+H2O2+H2O+ROH光子+CO2+CH3C=OORNHOCH3C=OORNHOOCH3ONCH3ONC=OO商業(yè)化產(chǎn)品中常見(jiàn)的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)吖啶酯化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)發(fā)光信號(hào)檢測(cè)光敏二極管、光敏電池、光電偶合器（CCD）結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、性能穩(wěn)定但靈敏度低、線性范圍較窄。主要特點(diǎn)原理光信號(hào)光電轉(zhuǎn)換器件電壓或電流信號(hào)放大單光子

4、計(jì)數(shù)器是目前高靈敏度發(fā)光分析儀的核心部件光電倍增管高壓高速放大器高速比較器高速分頻器發(fā)光樣品產(chǎn)生光子激發(fā)光陰極產(chǎn)生光電子在陽(yáng)極上形成較強(qiáng)信號(hào)脈沖信號(hào)相對(duì)發(fā)光單位數(shù)字脈沖(RLU)在各打拿極之間得到能量和數(shù)目的倍增單光子計(jì)數(shù)式發(fā)光檢測(cè)儀計(jì)算機(jī)打印機(jī)發(fā)光儀控制模塊發(fā)光儀執(zhí)行模塊控制器程控高壓計(jì)數(shù)/貯存器單光子計(jì)數(shù)器樣品運(yùn)動(dòng)/定位裝置程控自動(dòng)門鎖及檢測(cè)裝置原位注射泵光生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用范圍軍事偵測(cè)公安稽查衛(wèi)生檢疫藥物篩查醫(yī)學(xué)診斷環(huán)境檢測(cè)航天遙感生命科學(xué)……已成為現(xiàn)代生物技術(shù)最活躍的領(lǐng)域之一光生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)越性徹底消除了放射性危害無(wú)半衰期限制，試劑穩(wěn)定性和有效期大大延長(zhǎng)容易實(shí)現(xiàn)連續(xù)、動(dòng)態(tài)、重

5、復(fù)測(cè)定適合于復(fù)合標(biāo)記系統(tǒng)進(jìn)行多指標(biāo)并行測(cè)定操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)速度快，容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化靈敏度和線性范圍超過(guò)以往技術(shù)幾種標(biāo)記/檢測(cè)技術(shù)靈敏度的比較酶標(biāo)熒光放免發(fā)光靈敏度(mol/L)10-1810-1510-1210-9幾種標(biāo)記/檢測(cè)技術(shù)線性范圍的比較酶標(biāo)熒光放免發(fā)光線性范圍105104103102幾種標(biāo)記/檢測(cè)試劑的有效期比較酶標(biāo)熒光放免發(fā)光有效期（月）1815129630020,00040,00060,00080,000100,000試劑盒儀器特殊防護(hù)治理污染人民幣人民幣三種免疫測(cè)定技術(shù)的成本及費(fèi)用三種免疫測(cè)定技術(shù)的成本及費(fèi)用放免酶標(biāo)發(fā)光抗原：可誘導(dǎo)動(dòng)物免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的物質(zhì)。抗體：由動(dòng)

6、物免疫系統(tǒng)產(chǎn)生，可特異性結(jié)合某種物質(zhì)的球蛋白。免疫分析技術(shù)基本原理利用抗原、抗體之間的特異性結(jié)合來(lái)測(cè)定、分析特定物質(zhì)的方法免疫測(cè)定技術(shù)分類反應(yīng)結(jié)束后是否需要分離均相法（Homogeneous）非均相法（Heterogeneous）均相法（Homogeneous）免疫凝集法：自然凝集：血型測(cè)定肥達(dá)氏反應(yīng)；敏化凝集：血球凝集法凝膠（微粒）比濁法免疫擴(kuò)散法；免疫電泳法近場(chǎng)液閃法，酶--輔酶（亞基）配位法熒光偏振法，熒光共振法吖啶酯水解法，生物傳感器非均相法（Heterogeneous）免疫印跡（Western-blot）：基因表達(dá)分析、HIV感染確認(rèn)實(shí)驗(yàn)免疫組織化學(xué)技術(shù)：原位基因表達(dá)分析、臨

7、床病理學(xué)分析紙片法：早孕快速檢測(cè)、吸毒檢測(cè)快速、獻(xiàn)血快速檢測(cè)放射免疫法（RIA）：沉降法（放免）、固相法（免放，IRMA）熒光免疫法（FIA）；酶聯(lián)免疫法（EIA，ELISA）酶聯(lián)熒光法（FEIA）、化學(xué)發(fā)光法（LIA）酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光法（ELIA）、時(shí)間分辨熒光法（DELFIA）、電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）；……雙抗體夾心法（三明志法）原理固相支持物表面包被抗體標(biāo)記抗體待測(cè)物夾心法的劑量--反應(yīng)關(guān)系曲線信號(hào)強(qiáng)度（Y）線性范圍待測(cè)物濃度（X）Hoo