葉綠素的提取的實驗方案研究

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1、實驗葉綠體色素的提取分離一、目的通過對葉綠素的提取方法的研究，找出最方便、最簡單可行的實驗方法。二、材料用具及儀器藥品（1）層析液配方：①石油醚20ml+丙酮2ml+苯1ml②93號汽油③9ml95%乙醇+1ml苯（2）天平、研缽、燒杯、量筒、濾紙、脫脂棉、粉筆、表面皿、剪刀、漏斗、滴管、90-95%乙醇（3）紫鴨趾草、菜心、韭菜、菠菜等葉子三、原理葉綠體含有葉綠體色素，葉綠體色素主要包括有Chla、Chlb、葉黃素和胡蘿卜素，可用有機溶劑乙醇、丙酮等將它們提取出來（因為丙酮有毒，所以這里可以用酒精代替）。紙層析法是分離葉綠體色素最簡單的方法。它的原理是利用混合色素中

2、各個成分物理、化學性質(zhì)的差別，分別以不同程度分布于兩相中（即固定相和流動相）。由于它們以不同的速度移動，從而達到分離的目的。葉綠體色素容易受光的破壞，變成褐色。葉綠體色素具有熒光現(xiàn)象。四、方法1、紙層析法分離葉綠體色素（方法1）（1）稱取新鮮葉片（紫鴨趾草、菜心、菠菜對比效果）1克，剪碎，放在研缽中，加乙醇5m1，加入少許碳酸鈣，共研磨成勻漿。（2）提取葉綠素：①用濾紙過濾。②靜置勻漿5分鐘，用滴管直接吸取上面的色素提取液4～5滴。③用脫脂棉過濾。（3）取一塊預(yù)先干燥處理過的定性濾紙，將它剪成長約10cm，寬約1cm的濾紙條。用毛細管吸取色素提取液。在濾紙條的一端（約

3、距這一端的1cm處）劃出一條濾液細線，等濾液干燥后，再重復(fù)劃4～5次。（4）將濾紙條的另一端（約距這一端1cm處）拆成“V”字形，并將它掛在放有層析液的燒杯壁上（注意：色素線要略高于層析液面，且濾紙條下端最好不要碰到燒杯壁），蓋上培養(yǎng)皿。（5）經(jīng)幾分鐘后，觀察色素帶的分布，最上端為胡蘿卜素，其次是葉黃素，再次是葉綠素a，最后是葉綠素b。把色素提取液一滴一滴地滴在濾紙的中央（濾紙要平放在表面皿或培養(yǎng)皿上）。待色素點風干后，向該色素點上慢慢滴加層析液，使四種色素（葉綠素a、葉綠素b、葉黃素、胡蘿卜素）在濾紙上分離出來，形成4個圓圈。四種色素在濾紙上的移動速度是胡蘿卜素（橙

4、黃色）>葉黃素（黃色）>葉綠素a(藍綠色)>葉綠素b（黃綠色）。2、紙層析法分離葉綠體色素（方法2）（1）提取色素的步驟。（同前）（2）把色素提取液一滴一滴地滴在濾紙的中央（濾紙要平放在表面皿或培養(yǎng)皿上）。待色素點風干后，向該色素點上慢慢滴加層析液，使四種色素（葉綠素a、葉綠素b、葉黃素、胡蘿卜素）在濾紙上分離出來，形成4個圓圈。四種色素在濾紙上的移動速度是胡蘿卜素（橙黃色）>葉黃素（黃色）>葉綠素a(藍綠色)>葉綠素b（黃綠色）。3、層析法分離葉綠素（方法3）（1）提取葉綠素的步驟。前同。（2）可用粉筆代替濾紙條。同樣畫濾液細線，等濾液干燥后，再重復(fù)劃4～5次。（3

5、）將粉筆放入放有層析液的燒杯中。（注意：色素線要略高于層析液面）（4）同樣的觀察。五、創(chuàng)新點：1、研磨加入少許碳酸鈣，以及用乙醇代替丙酮提取。加入少許碳酸鈣的目的是為了防止在研磨過程中，葉綠素受到破壞。因為葉綠素是一種含鎂的化合物，其中的鎂易被H+、Cu2+、Zn2+等取代。當被H+取代后，就形成去鎂葉綠素，呈黃褐色。2、過濾用了三種方法。色素分子比較大，不容易透過濾紙，濾紙有較強的吸附能力而使色素吸附在濾紙上，從而降低色素濃度,影響實驗效果。因此可以把勻漿靜置后直接用滴管吸取。但又考慮怕有其他雜質(zhì)。又采用了脫脂棉過濾，葉綠素等色素分子是脂溶性,根據(jù)相似相溶原理,用脫

6、脂棉可減少實驗過程中色素的流失,增強實驗效果。3、3組層析方法的對比?？梢哉页鲎罴训膶游龇椒?。當采用濾紙條時，有好多學生對“不讓濾液細線觸及到層析液”這一點做的不是很好。所以后面又找到了兩種方法。一種是直接用粉筆代替濾紙條，粉筆比較好固定。還有就是用圓形濾紙，把提取液點在中央，之后點層析液，這樣操作也比較簡單。4、層析液的改進。丙酮是有毒物質(zhì)，我們可以考慮用其他物品代替。層析液主要是需要脂溶性的有機物。我們可以用常見的酒精+苯或者93號汽油。5、多種葉綠素提取材料的選擇。可以通過實驗選擇出最易提取、提取效果最好的材料。