實驗二 葉綠素的提取與分離

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1、實驗二葉綠素的提取和分離一、實驗?zāi)康膹母缓~綠素的菠菜葉片中提取葉綠素，并在薄層層析板上點樣使葉綠素顯示不同顏色。二、實驗原理要求同學們先查詢資料，了解葉綠素相關(guān)知識，實驗課上老師講解。三、實驗材料、器具研缽、托盤天平、分液漏斗、干燥錐形瓶、毛細管、薄層層析板、飽和NaCl溶液、無水Na2SO4四、實驗步驟1、葉綠素的提取在中放入幾片(約5g)菠菜葉(新鮮的或冷凍的都可以．如果是冷凍的，解凍后包在紙中輕壓吸左水分)。加入10mL2:1石油醚和丙酮混合液，適當研磨。將提取液用滴管轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入10mL飽和NaCl溶液(防止生成乳濁液)除去水溶性物質(zhì)，分去H2O層，

2、再用蒸餾水洗滌兩次。將有機層轉(zhuǎn)入干燥的小錐形瓶中，加2g無水Na2SO4，通風處理。處理后的液體傾至另一錐形瓶中(如溶液顏色太淺，可在通風柜中適當蒸發(fā)濃縮)。2、點樣用一根內(nèi)徑1mm的毛細管，吸取適量提取液，輕輕地點在距薄板一端1cm處，平行點兩點，兩點相距1cm左右。若一次點樣不夠，可待樣品溶劑揮發(fā)后．再在原處點第二次，但點樣斑點直徑不得越過2mm。3、展開先在小燒杯中放入展開劑[用石油醚和丙酮按3：1的比例進行混合作為展開劑，再將薄層板斜靠于層析缸內(nèi)壁。點樣端接觸展開劑但樣點不能浸沒于展開劑中，密閉層析缸。待展開劑上升到距薄層板另一端約1cm時，取出平放，用鉛筆或小

3、針劃前沿線位置，在空氣中晾干或用電吹風吹干薄層。毛細管點樣薄層色譜展開4、觀察層析板并記錄實驗結(jié)果。薄層層析時Rf值表示的是原點到層析斑點中心的距離與原點的到展層溶劑的前沿距離包括擴散最快的是什么，擴散最慢的是什么最寬的色素帶是什么，最窄的色素帶是什么哪兩個色素帶距離相距最遠，哪兩個最近等等各種色素在層析液中的溶解度不同，溶解度高的隨層析液在濾紙上擴散的快，反之則慢。最快：胡蘿卜素次之：葉黃素次之：葉綠素A最慢：葉綠素B顏色分別為：橙黃色、黃色、藍綠色和黃綠色，最寬的是葉綠素A最窄的是胡蘿卜素胡蘿卜素和葉綠素B最遠葉綠素A和葉綠素B最近實驗十四、植物色素的提取和薄層色譜

4、分析一、實驗?zāi)康模?、了解薄層色譜的基本原理和應(yīng)用。2、掌握薄層色譜的操作技術(shù)。二、實驗原理：1、原理薄層色譜(ThinLayerChromatography)常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固－液吸附色譜。樣品在薄層板上的吸附劑（固定相）和溶劑（移動相）之間進行分離。由于各種化合物的吸附能力各不相同，在展開劑上移時，它們進行不同程度的解吸，從而達到分離的目的。2、薄層色譜的用途：1）化合物的定性檢驗。（通過與已知標準物對比的方法進行未知物的鑒定）在條件完全一致的情況，純碎的化合物在薄層色譜中呈現(xiàn)一定的移動距離，稱比移值（Rf值），所以利用薄層色譜法可以鑒定化合物的純

5、度或確定兩種性質(zhì)相似的化合物是否為同一物質(zhì)。但影響比移值的因素很多，如薄層的厚度，吸附劑顆粒的大小，酸堿性，活性等級，外界溫度和展開劑純度、組成、揮發(fā)性等。所以，要獲得重現(xiàn)的比移值就比較困難。為此，在測定某一試樣時，最好用已知樣品進行對照。距離溶劑前沿至原點中心的點中心的距離溶質(zhì)最高濃度中心至原=fR2）快速分離少量物質(zhì)。（幾到幾十微克，甚至0.01μg）3）跟蹤反應(yīng)進程。在進行化學反應(yīng)時，常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失，來判斷反應(yīng)是否完成。4）化合物純度的檢驗（只出現(xiàn)一個斑點，且無拖尾現(xiàn)象，為純物質(zhì)。）此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色

6、譜分析的物質(zhì)。3、色譜法色譜法是與植物天然色素的分離提取同時發(fā)展起來的.色譜法(紙色譜,薄層色譜和柱色譜)至今仍然是分離葉綠素等天然色素最有效的方法。色譜法分離葉綠體色素的基本原理是利用不同色素在各種有機溶劑中的分配系數(shù),或在吸附劑上的吸附能力的不同,當它們通過色譜柱/床時,這種分配或吸附過程反復(fù)多次地進行,最后將它們一一分離開來。通常認為,紙色譜屬于分配色譜.它是以濾紙為惰性支持物,濾紙纖維一般能吸收約20%的水分,其中有6~7%以氫鍵形式與纖維素上的羥基結(jié)合,構(gòu)成紙色譜的固定相.在展開過程中,被分離組分在展開劑和固定相之間不斷進行分配,龍巖學院分析化學精品課程分析化

7、學實驗項目指導書2達到相互分離.薄層色譜和柱色譜的吸附劑(固定相)有硅膠,氧化鋁,硅藻土等無機物,也有糖類,纖維素,聚酰胺,C18和離子交換樹脂等有機物.它們的分離機理也各不相同,如吸附,分配,氫鍵,正相和反相色譜等。對于紙色譜或薄層色譜,毛細管作用是推動溶劑展開的動力.被分離物質(zhì)在圖譜上的位置,可用比移值Rf表示Rf=原點至斑點中心的距離/原點至展開劑前沿的距離。植物光合作用是自然界最重要的現(xiàn)象,它是人類所利用能量的主要來源.在把光能轉(zhuǎn)化為化學能的光合作用過程中,葉綠體色素起著重要的作用.高等植物體內(nèi)的葉綠體色素有葉綠素和類胡蘿卜素兩類