病毒感染的檢查方法與防治原則

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1、第25章病毒感染的檢查方法與防治原則講授陳利玉內(nèi)容第一節(jié)病毒感染的診斷(檢查方法）第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防(自學(xué)）第三節(jié)病毒感染的治療（自學(xué)）第一節(jié)病毒感染的診斷（Diagnosisofviralinfection）?標(biāo)本采集與送檢原則?病毒感染的檢查方法一、標(biāo)本采集與送檢原則?按疾病種類與病程采取不同標(biāo)本?在發(fā)病早期與用藥之前采取標(biāo)本?無(wú)菌操作，有菌標(biāo)本用“雙抗”（青、鏈霉素）或“三抗”（青、鏈霉素+兩性霉素B）處理?冷藏速送，病變組織用50％甘油保存?血清學(xué)檢測(cè)：IgM—單份血清,IgG—雙份血清二、檢

2、查方法?病毒的形態(tài)學(xué)檢查?病毒的血清學(xué)檢查?病毒的分子生物學(xué)檢查?病毒的分離培養(yǎng)與鑒定1.病毒形態(tài)學(xué)檢查電子顯微鏡：可觀察各種病毒的形態(tài)但設(shè)備貴、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡：可觀察大病毒（痘病毒）和包涵體對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大呼腸病毒感染回腸上皮細(xì)胞電鏡照片ElectronmicrographsInclusionbodyCytomegaliccellthatcontainsadense,"owl'seye,"acidophilicintranuclearinclusionbodyNegrybody2.病毒血

3、清學(xué)檢查?已知抗原—測(cè)抗體（診斷）?已知抗體—測(cè)抗原（鑒定病毒屬、種、型、亞型）(1)中和試驗(yàn)(Neutralizationtest)(2)血凝抑制試驗(yàn)(Hemagglutinationinhibitiontest)(3)免疫標(biāo)記法(FIA、EIA、RIA)⑷蛋白印跡(Westernblot)2.病毒血清學(xué)檢查方法：ImmunofluorescensetestImmunofluorescensetestPositiveimmunofluorescencetestforrabiesvirusantigen.(S

4、ource:CDC)HEL細(xì)胞中CMVIE1蛋白的表達(dá)Enzymeimmunoassay(EIA)ELISAColouredwellsindicatereactivityAIDS的確診試驗(yàn)Westernblot3.病毒分子生物學(xué)檢查?可用于檢測(cè)常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)不能培養(yǎng)的病毒?可用于檢測(cè)少量標(biāo)本或含少量病毒的標(biāo)本?可用于抗體產(chǎn)生前或不能產(chǎn)生抗體的免疫缺陷患者檢測(cè)?可對(duì)病毒進(jìn)行定量檢測(cè)，有助于療效監(jiān)測(cè)?可對(duì)病毒進(jìn)行基因分型?靈敏度高、特異性好、快速、簡(jiǎn)捷優(yōu)點(diǎn)：3.病毒分子生物學(xué)檢查?核酸電泳(nucleicacide

5、lectrophoresis)?核酸雜交(nucleicacidhybridization)?核酸擴(kuò)增(PCR）?基因芯片(genechip)?基因測(cè)序(genesequence)方法：4.病毒的分離培養(yǎng)與鑒定:?病毒的分離培養(yǎng)?病毒的鑒定?病毒數(shù)量及感染性測(cè)定病毒的分離培養(yǎng)方法：?動(dòng)物接種?雞胚培養(yǎng)?細(xì)胞培養(yǎng):⑴動(dòng)物接種(animalinoculation)動(dòng)物：鼠、兔、猴、黑猩猩等優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動(dòng)物模型缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高、動(dòng)物體內(nèi)常帶有潛伏病毒。目前已很少應(yīng)用。⑵雞胚培養(yǎng)(embryo

6、natedeggculture)受精卵孵育10-12天雞胚接種病毒孵育2-7天收獲相應(yīng)的材料進(jìn)行鑒定雞胚接種部位：尿囊腔接種絨毛尿囊膜接種卵黃囊接種羊膜腔接種優(yōu)點(diǎn)：易管理不帶微生物成本較低缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜目前用雞胚培養(yǎng)的病毒主要是流感病毒⑵雞胚培養(yǎng)(embryonatedeggculture)(3)細(xì)胞培養(yǎng)(cellculture)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的方式分:?單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayercellculture）?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspendedcellculture）根據(jù)細(xì)胞來(lái)源、染色體特征及傳代次數(shù)分:?

7、原代培養(yǎng)細(xì)胞?二倍體細(xì)胞株?傳代細(xì)胞系或株(3)細(xì)胞培養(yǎng)(cellculture)①原代培養(yǎng)細(xì)胞（primaryculturalcells)組織組織塊分散的單個(gè)細(xì)胞單層細(xì)胞剪碎蛋白酶(原代細(xì)胞)單層細(xì)胞(次代細(xì)胞)傳代培養(yǎng)培養(yǎng)基①原代培養(yǎng)細(xì)胞（primaryculturalcells)epithelialcells特點(diǎn):?對(duì)多種病毒敏感?生長(zhǎng)能力有限,獲取成本高?可攜帶潛伏病毒應(yīng)用:?病毒分離與鑒定?病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)研究?不能用于制備疫苗①原代培養(yǎng)細(xì)胞（primaryculturalcells)體外分裂50~100

8、代仍保持二倍染色體數(shù)目的單型細(xì)胞特點(diǎn):?對(duì)多種病毒敏感?不帶異種蛋白(人源性)?不帶病毒,無(wú)致瘤潛能應(yīng)用:?病毒分離與鑒定?病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)研究?制備疫苗②二倍體細(xì)胞株(diploidcellstrain)fibroblasticcells③傳代細(xì)胞系(continuouscellline)特點(diǎn):?對(duì)多種病毒敏感性高?繁殖能力強(qiáng),傳代時(shí)間長(zhǎng)?有致癌危險(xiǎn)(來(lái)源于癌細(xì)胞或突變的二倍體細(xì)胞株)應(yīng)用:?病毒分離與