病毒感染的檢查方法與防治原則

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1、病毒感染的檢查方法與防治原則南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)院微生物學(xué)系張其威PhDEmail：zhang.qiwei@yahoo.comQQ:3910035第25章1病原學(xué)診斷的意義有助于臨床治療（抗生素、干擾素等）為控制病毒學(xué)疾病的流行提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)（疫苗等）2第一節(jié)病毒感染的檢查3病毒感染的檢查檢測(cè)內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原（如血凝素）病毒核酸（PCR）病毒酶類(lèi)：如逆轉(zhuǎn)錄酶電鏡直接觀察光鏡檢查包涵體分離培養(yǎng)（如IgM、IgG）4一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意：1.標(biāo)本用“雙抗”（2000-

2、10000U）或兩性霉素B（2ug/ml)處理2.低溫保存，盡快送檢（冰塊，CO2）3.血清學(xué)診斷采雙份血清（發(fā)病初，2-3周）5二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）雞胚接種（egginoculation）動(dòng)物接種（animalinoculation）6二、病毒的分離與鑒定一般程序：標(biāo)本無(wú)菌處理動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)指標(biāo)陽(yáng)性指標(biāo)陰性病毒鑒定盲傳2～3代指標(biāo)陰性病毒陰性7（一）病毒的分離培養(yǎng)1.細(xì)胞培養(yǎng)（簡(jiǎn)述）單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayercellculture）分類(lèi)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspe

3、ndedcellculture）原代細(xì)胞（primarycell）細(xì)胞種類(lèi)二倍體細(xì)胞（diploidcell）傳代細(xì)胞系（continuouscellline）8病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞91.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)組織組織塊分散的單個(gè)細(xì)胞單層細(xì)胞剪碎培養(yǎng)基(原代細(xì)胞)單層細(xì)胞(次代細(xì)胞)傳代培養(yǎng)蛋白酶10特點(diǎn)：①對(duì)多種病毒敏感②生長(zhǎng)能力有限（20代）,獲取成本高③可攜帶潛伏病毒（EB）1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)11(2)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)體外分裂50～100代仍保持二倍體染色體數(shù)目，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)

4、。特點(diǎn)：①對(duì)多種病毒敏感②不帶異種蛋白(人源性)③不帶病毒，無(wú)致瘤潛能④可傳50-100代左右1.細(xì)胞培養(yǎng)12(3)傳代細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)：①對(duì)多種病毒敏感性高②繁殖能力高，傳代時(shí)間長(zhǎng)③有致癌危險(xiǎn)，不能用于疫苗生產(chǎn)（由腫瘤細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而來(lái)）1.細(xì)胞培養(yǎng)132.雞胚培養(yǎng)采用孵化9～14天的雞胚絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類(lèi)皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）嗜神經(jīng)病毒14尿囊腔152、雞

5、胚培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜1617183.動(dòng)物接種應(yīng)用：尚無(wú)敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)（HCV等）動(dòng)物：兔、鼠、黑猩猩、猴等優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動(dòng)物模型缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動(dòng)物體內(nèi)常帶有潛伏病毒，安全性要求高191．病毒增殖鑒定(1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,CPE）①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；②形成多核巨細(xì)胞或稱(chēng)融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。（二）病毒的鑒定2021①細(xì)胞變圓

6、、聚集、壞死、溶解或脫落(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)22麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞②形成多核巨細(xì)胞或稱(chēng)融合細(xì)胞(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)23③形成包涵體(inclusionbody)(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)24腮腺炎病毒感染細(xì)胞(2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋紅細(xì)胞表面HA受體25(3)干擾現(xiàn)象（interference）風(fēng)疹病毒＋人胚腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒

7、＋人胚腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚腎細(xì)胞風(fēng)疹病毒？?？刹《荆?）CPE(-)—風(fēng)疹病毒(+)埃可病毒(-)CPE(+)—風(fēng)疹病毒(-)?？刹《?+)26(4)細(xì)胞代謝改變細(xì)胞代謝變慢pH改變（adenovirus）272.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡：可見(jiàn)大病毒（痘類(lèi)病毒），對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大283.病毒血清學(xué)鑒定鑒定病毒種、型、亞型(1)血凝抑制試驗(yàn)（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型與亞型鑒定病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)/血凝效價(jià)）病毒＋特異性

8、抗體＋雞紅細(xì)胞＝不凝集（血凝抑制試驗(yàn)）2930(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA/ELISA、RIA）——多種病毒鑒定(3)凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)(gelimmuno-diffusiontest)——多種病毒鑒定3.病毒血清學(xué)鑒定314.病毒分子生物學(xué)鑒定