病毒感染的檢查方法與防治原則ppt課件

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1、病毒感染的檢查方法與防治原則目的與要求了解病毒的診斷，抗病毒治療，病毒感染的預防。第一節(jié)病毒感染的檢查方法病毒感染的檢查檢測內容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原病毒核酸病毒酶類：如逆轉錄酶電鏡直接觀察光鏡檢查包涵體分離培養(yǎng)一、標本的采集與送檢原則基本與細菌相似，但應注意：1.標本用“雙抗”或兩性霉素B處理2.低溫保存，盡快送檢3.血清學診斷采雙份血清二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)細胞培養(yǎng)（cellculture）雞胚接種（egginoculation）動物接種（animalinoc

2、ulation）1.雞胚培養(yǎng)采用孵化9～14天的雞胚絨毛尿囊膜痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔流感病毒的初次分離卵黃囊嗜神經(jīng)病毒1、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低缺點：操作程序復雜2.動物接種應用：尚無敏感細胞的病毒培養(yǎng)動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等優(yōu)點：結果易觀察，可建立動物模型缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物體內常帶有潛伏病毒病毒的分離培養(yǎng)3.細胞培養(yǎng)單層細胞培養(yǎng)（monolayercellculture）分類懸浮細胞培養(yǎng)（suspendedcell

3、culture）原代細胞（primarycell）細胞種類二倍體細胞（diploidcell）傳代細胞系（continuouscellline）病毒的細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)瓶單層細胞1．病毒增殖鑒定(1)細胞病變效應（cytopathiceffect,CPE）①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；②形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；③在培養(yǎng)細胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。（二）病毒的鑒定①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落麻疹病毒感染細胞呼吸道

4、合胞病毒感染細胞②形成多核巨細胞或稱融合細胞(1)細胞病變效應(cytopathiceffect,CPE)③形成包涵體(inclusionbody)(1)細胞病變效應(cytopathiceffect,CPE)腮腺炎病毒感染細胞(2)紅細胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋紅細胞表面HA受體(3)干擾現(xiàn)象（interference）風疹病毒＋人胚腎細胞病毒增殖，CPE(－)?？刹《荆伺吣I細胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚腎細胞風疹病毒？埃可病毒CPE(-)—風疹病毒(

5、+)埃可病毒(-)CPE(+)—風疹病毒(-)?？刹《?+)2.病毒數(shù)量與感染性測定1.蝕斑形成試驗（plaqueformationtest）2.50％組織細胞感染量（50％tissuecultureinfectiousdose,TCID50）感染性病毒量2.病毒形態(tài)學鑒定電子顯微鏡：設備、操作復雜，應用受限光學顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），對一般病毒檢測意義不大3.病毒血清學鑒定用已知的抗體，鑒定病毒種、型、亞型(1)血凝抑制試驗--—正粘病毒型與亞型鑒定病毒＋雞紅細胞＝凝集（血凝試驗）病毒

6、＋特異性抗體＋雞紅細胞＝不凝集（血凝抑制試驗）(2)免疫標記法（FIA、EIA、RIA）——多種病毒鑒定三、病毒分子生物學鑒定抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴增核酸雜交基因芯片基因測序四、病毒感染的血清學診斷應用：①采取標本分離病毒為時已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實所分離的病毒的臨床意義④進行血清流行病學調查等1.中和試驗（neutralizingtest）病毒＋中和抗體病毒失去感染性特點：特異性高，抗體維持時間長應用：人群免疫情況的調查臨床診斷少用五、病毒感染的快速診斷數(shù)小

7、時內出結果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗體檢測（IgM）病毒的快速診斷光鏡-----包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子生物學技術雜交SouthernblotPCRNorthernblot第二節(jié)病毒感染的防治原則滅活疫苗（inactivatedvaccine）活疫苗（livingvaccine）重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）亞單位疫苗（subunitvaccine）化學提取或人工合成疫苗重組疫苗（recombinantvaccine）核酸疫苗（nucleic

8、acidvaccine）一、人工主動免疫常用生物制品二、人工被動免疫常用生物制品免疫球蛋白血清丙種球蛋白細胞免疫制劑IFN-α、β、γ細胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF淋巴因子激活的殺傷細胞——LAK細胞三、病毒感染的治療核苷類藥物非核苷類反轉錄酶抑制劑蛋白酶抑制劑2.干擾素和干擾素誘生劑3.中草藥4.基因治療劑5.治療性疫苗1.抗病毒化學制劑反義寡核苷酸干擾RNA核酶（ribozyme）核苷類藥物作用機制HSV/VZV無環(huán)鳥苷（NA）病毒胸苷激酶NA一磷酸宿主細胞激酶NA三磷