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1、離體蟾蜍心臟灌流【摘要】將蟾蜍的心臟完整離體，插入挖心套管，分別用氯化鈉，氯化鉀，氯化鈣，腎上腺素和乙酰膽堿處理，可觀察到不同藥物對心臟的影響。氯化鈉，氯化鉀與乙酰膽堿均使心搏減弱，氯化鈣與腎上腺素能加強心臟收縮力和心率?！緦嶒灢牧稀縿游铮褐腥A蟾蜍試劑：5%氯化鈉溶液；1%氯化鉀溶液，2%氯化鈣，任氏液（Ringer’ssolution），1：100000腎上腺素溶液，1：100000乙酰膽堿溶液，任氏液器材：蛙類手術器械，BL420E+生物機能分析系統(tǒng)，張力換能器，蛙心套管，試管夾，滑輪（杠桿）【實驗內(nèi)容】1.離體蟾蜍心臟的制備(1)取一蟾蜍毀其腦和脊髓，仰位固定于蛙
2、板上，暴露心臟。(2)心臟插管分支前的主動脈下穿一線并打一松結備用，左側主動脈穿一根線并結扎之，用左手提起結扎線，右手用眼科剪在左側主動脈距分叉部3mm處剪一“V”型口。將盛有少量任氏液的蛙心套管(用拇指將套管堵住，以防套管中的任氏液流出)從“V”型口插入動脈球底部，然后稍后撤套管，再轉向心室中央方向插入，可見液面隨心搏升降即可。將分支前主動脈下的松結扎緊，并固定在套管的小突上。小心提起套管和心臟，剪斷主動脈左右分支；結扎與靜脈竇相連的后腔靜脈，并在結扎線以下剪斷，將心臟摘出。2.觀察項目(1)開啟系統(tǒng)，描計一段正常心搏曲線。注意觀察心跳頻率和強度以及心臟的收縮、舒張程
3、度。(2)向蛙心套管內(nèi)滴加5%NaCl溶液，觀察心跳變化。(3任氏液洗脫，待心跳恢復，加入2%氯化鈣溶液1～2滴，觀察心跳變化。(4)任氏液洗脫，待心跳恢復，加入1%氯化鉀溶液1～2滴，觀察心跳變化。(5)任氏液洗脫，待心跳恢復，加入1:100000腎上腺素溶液2～3滴，觀察心跳變化。(6)任氏液洗脫，待心跳恢復，加入1:100000乙酰膽堿溶液1～2滴，觀察心跳變化?！緦嶒灲Y果】加入各種藥品后心臟心搏曲線變化如圖所示圖一：NaCl對心臟的影響圖二：Kcl對心臟的影響圖三：CaCl2對心臟的影響圖四：腎上腺素對心臟的影響圖五：乙酰膽堿對心臟的影響【實驗討論】1、滴加氯化
4、鈉溶液，心跳顯著減弱。心肌細胞的收縮對細胞外的濃度有很高的依賴性，因其是觸發(fā)心肌質(zhì)網(wǎng)釋放的關鍵。當在任氏液中滴加氯化鈉時，Na+與內(nèi)流的競爭性抑制導致內(nèi)流減少，心肌的收縮活動也隨之減弱。若細胞外離子濃度低至接近零時，雖然心肌細胞仍能產(chǎn)生動作電位，但沒有的內(nèi)流，不能引起收縮。即“興奮-收縮脫耦聯(lián)”。2、滴加氯化鉀溶液后，心跳減弱至停止本實驗所用的氯化鉀濃度對于蟾蜍體液來講屬于較高濃度，而細胞外K+濃度較高時K+與有競爭性拮抗作用，K+可抑制細胞膜對的轉運，使進人細胞內(nèi)減少，心肌的興奮一收縮耦聯(lián)過程減弱心肌收縮力降低。且當細胞外K+濃度較高時，膜內(nèi)外的K+濃度梯度減小，靜息
5、電位的絕對值過度減少，Na+通道失活，心肌的興奮性完全喪失，心肌不能興奮和收縮，停止于舒張狀態(tài)。此時，僅由來構成動作電位，鈣通道激活慢，因此去極化上升幅度小而緩慢，使興奮傳導性降低。而當K+濃度增高值不大時，由于膜對K+的通透性較大，靜息電位主要由細胞內(nèi)外K+濃度差決定，當K+濃度稍升高時，靜息電位升高，與閾電位差值減小，使細胞興奮性增加。當細胞外K+濃度升高時,細胞膜對鉀的通透性升高,心室肌細胞復極過程加速,平臺期縮短,不應期也縮短。均能增加工作細胞的收縮舒張速率。3、滴加氯化鈣溶液中，離體蛙心收縮力顯著增強首先濃度上升，內(nèi)流增加，導致心肌質(zhì)網(wǎng)釋放量增加，使心肌收縮力
6、增強。內(nèi)流是慢反應細胞（如竇房結P細胞）0期去極化和快反應細胞（工作細胞）2期的主要離子活動.當細胞外濃度升高時，內(nèi)流加快,慢反應細胞0期去極化加快加強，傳導性升高。當肌漿中的濃度不斷升高，與肌鈣蛋白結合數(shù)量不斷增加，甚至達到只結合不解離的程度，于是，心肌將會處于持續(xù)收縮狀態(tài)，稱為“鈣僵”。但同時，濃度上升，與Na+內(nèi)流競爭性抑制作用使得Na+內(nèi)流降低，從而觸發(fā)Na+快速內(nèi)流產(chǎn)生0期去極化就比較困難,使閾電位上升，與靜息電位的差距增大，興奮性降低。發(fā)生興奮后，Na+內(nèi)流的抑制則導致0期去極化速度和幅度降低,傳導性下降。4、滴加腎上腺素后，蛙心收縮增強在心肌細胞起作用的主
7、要是去甲腎上腺素。去甲腎上腺素與心肌細胞膜上的β腎上腺素受體結合,激活腺苷酸環(huán)化酶(AC),使細胞內(nèi)cAMP濃度升高,激活PKA和細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)磷酸化過程,使心肌細胞膜上的鈣通道激活，動作電位平臺期Ca2+內(nèi)流增加，心肌收縮力增強。另外去甲腎上腺素能加強4期的內(nèi)向電流If,對浦肯野細胞影響較大，使心率加快。另外，腎上腺素還能降低肌鈣蛋白與親和力，促使肌鈣蛋白對的釋放速率增加，導致了心肌細胞收縮能力的增強。腎上腺素也能提高肌漿網(wǎng)膜攝取的速度，刺激Na+—交換使復極期向細胞外排出的作用加速。提高了工作細胞的收縮舒張速率，因此不會出現(xiàn)鈣僵，收縮
