蛙類斯氏離體心臟灌流

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1、山東大學實驗報告姓名***系年級*********學號***********科目動物生理學實驗同組者***、***日期***********蛙類斯氏離體心臟灌流【實驗目的】1.學習斯氏離體蛙心灌流法；2.了解心肌的生理特性；3.觀察Na+、K+、Ca2+離子等對離體心臟活動的影響?！緦嶒炘怼啃募【哂凶詣庸?jié)律性（autorhythmicity）收縮的特性，可以用人工灌流的方法，研究心臟活動的規(guī)律及特點；還可以觀察灌流液成分的改變對離體心臟活動的影響。【實驗材料】1.材料：蟾蜍。2.器具：常用手術器械，解剖盤，蛙板（木質），毀髓針，玻璃分針，手術剪，手術鑷，鐵釘，蛙心套管，套管夾，雙凹夾，

2、滑輪，蛙心夾，支架，雙針形露絲刺激電極，滴管，小燒杯，棉線，張力傳感器，生理信號采集系統(tǒng)。3.試劑：任氏液，5％NaCl溶液，1％KCl溶液，2％CaCl2溶液。【實驗步驟】1.暴露動物心臟取一只蟾蜍，雙毀髓后背位置于蛙板上，一手持手術鑷提起胸骨后方的皮膚，另一只手持手術剪剪開一個小口，然后將剪刀由開口處伸向皮下，向左、右兩側下頜角方向剪開皮膚。將皮膚掀向頭端，再用手術鑷提起胸骨后方的腹肌，在腹肌上剪一口，將金冠剪緊貼體壁向前伸入（勿傷及心臟和血管），并沿皮膚切口方向剪開體壁，剪斷左右烏喙骨和鎖骨，使創(chuàng)口呈一倒三角形。一手持眼科鑷，提起心包膜，另一手用眼科剪剪開心包膜，暴露心臟。2.斯氏

3、蛙心插管仔細識別心臟周圍的大血管。在左主動脈下方穿一線，并打一活結備用。左手提起主動脈上的結扎線，右手用眼科剪在結扎線下方、沿向心方向將動脈壁上剪一斜口。選擇大小適宜的蛙心套管，然后將成盛有少量（套管內2~3cm高度）任氏液（內含葡萄糖）的斯氏蛙心套管，由開口處插入動脈圓錐。當套管尖端到達動脈圓錐基部時，應將套管稍稍后退，使尖端向動脈圓錐的背部后下方及心尖方向推進，經主動脈瓣插入心室腔內（于心室收縮時插入，但不可插得過深，以免心室壁堵住套管口）。此時可見血液沖入套管，并使液面隨心臟搏動而上下移動，表明操作成功（否則需退回并重新插入）。用滴管吸取套管中的血液，更換新鮮任氏液。穩(wěn)定住套管后，

4、輕輕提起備用線，將左、右主動脈連同插入的套管用雙線6山東大學實驗報告緊緊扎緊（不得漏夜），再將結線固定在套管的小玻璃鉤上，然后剪斷結扎線上方的血管。輕輕提起套管和心臟，看清靜脈竇的位置，于靜脈竇下方剪斷有牽連的組織，僅保留靜脈竇與心臟的聯(lián)系，使心臟離體。（切勿損傷靜脈竇）。用任氏液反復沖洗心室內余血，使套管內灌流液不再有殘留血液。保持套管內液面高度一致（1.5~2cm），即可進行實驗。圖1斯氏蛙心插管法3.連接實驗裝置將插好離體心臟的套管固定在支架上，用蛙心夾夾住少許心尖部的肌肉（不可夾得過多，以免因夾破心室而漏液）。在將蛙心夾上的系線繞過一個滑輪與張力傳感器相連。注意：勿使灌流液滴到傳

5、感器上。打開生理信號采集系統(tǒng)，接通張力傳感器輸入通道。調節(jié)系線的拉力，使心臟的收縮活動在顯示屏上出現(xiàn)。調節(jié)顯示器上心臟收縮曲線的幅度適中。調整掃描速度，使心搏曲線的幅度與寬度適中。圖2實驗裝置示意圖4.實驗觀察（1）記錄正常心搏曲線。（2）向套管內滴加2-3滴5％NaCl溶液，做好加藥記號，觀察心搏曲線的頻率及振幅變化當曲線出現(xiàn)明顯變化時，應立即吸去套管中的灌流液，并做好沖洗標記，迅速用新鮮任氏液清洗，待心搏恢復正常。（3）同法向套管內加入1-3滴2％CaCl2溶液，觀察并記錄心搏曲線的變化。當出現(xiàn)明顯變化時，立即更換任氏液，待心搏恢復正常（如果恢復遲緩，可多次沖洗）。6山東大學實驗報告

6、（4）向套管中加入1-2滴1％KCl溶液，記錄心搏曲線的變化?！緦嶒灲Y果及分析】背景知識：心肌細胞動作電位和主要離子活動（以心室肌細胞為例）。心室肌細胞的動作電位由除極化過程和復極化過程所組成，共分為五個時期：圖3心室肌細胞動作電位和主要離子活動1.除極化過程（0期）：當心肌細胞接受一個閾上刺激時，膜內電位由靜息狀態(tài)時的-90mV去極化并反極化到+20mV~+30mV，構成動作電位的上升相，稱為0期。歷時僅1~2ms。其正電位部分稱為超射。形成機制：當心室肌細胞受到刺激產生興奮時，首先引起Na+離子通道（快Na+通道）的部分開放和少量Na+離子內流，膜局部去極化。當去極化到閾電位水平（-

7、65mV）時，大大增加膜上Na+離子通道開放的數量，出現(xiàn)再生性Na+離子內流，使膜進一步去極化，最終使膜內外電位發(fā)生反轉，趨近于Na+離子的平衡電位。2.復極化過程：當心室肌細胞去極化達到頂峰后，開始復極化過程。根據膜電位變化曲線的形狀及其形成的離子機制不同，可將其可分為4個時期：（1）快速復極化初期（1期）：膜電位由+30mV迅速下降至0mV左右，歷時約10ms。與0期去極化組成了鋒電位。形成機制：Na+離子通道失活，Na+離子內