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1、植物組織中淀粉含量的測(cè)定2007-01-1208:55Ⅰ?蒽酮硫酸法一、原理?淀粉是由葡萄糖殘基組成的多糖，在酸性條件下加熱使其水解成葡萄糖，然后在濃硫酸的作用下，使單糖脫水生成糠醛類化合物，利用蒽酮試劑與糠醛化合物的顯色反應(yīng)，即可進(jìn)行比色測(cè)定。?二、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器設(shè)備?（一）實(shí)驗(yàn)材料?任何植物材料。?（二）試劑?濃硫酸（比重?1.84?）。?9.2mol/L?HClO?4?。?2%蒽酮試劑，同實(shí)驗(yàn)?24?。?（三）儀器設(shè)備?電子天平，容量瓶：?100?mL?4?個(gè)、?50?mL?2?個(gè)，漏斗，小試管若干支，電爐，刻度吸管?0.5mL?1?支、?2.0?mL?3?支、?5?mL?4?支
2、，分光光度計(jì)，記號(hào)筆。?三、實(shí)驗(yàn)步驟?????1.?標(biāo)準(zhǔn)曲線制作?取小試管11支從0～10編號(hào)，按表24-3加入溶液和蒸餾水。以下步驟按苯酚法或蒽酮法均可，見(jiàn)方法一或方法二，繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。表24-3??各試管加入標(biāo)準(zhǔn)液和蒸餾水量管??號(hào)01～23～45～67～89～10淀粉標(biāo)準(zhǔn)液(ml)00.40.81.21.62.0蒸?餾?水（ml）2.01.61.20.80.40淀粉含量（mg）040801201602002.?樣品提取?稱取?50?～?100?mg?粉碎過(guò)?100?目篩的烘干樣品，置于?15?mL?刻度試管中，加入?6?～?7?mL?80?％乙醇，在?80?℃水浴中提取?30?m
3、in?，取出離心（?3000?rpm?）?5?min?，收集上清液。重復(fù)提取兩次（各?10?min?）同樣離心，收集三次上清液合并于燒杯，置于?85?℃恒溫水浴，使乙醇蒸發(fā)至?2?～?3?mL?，轉(zhuǎn)移至?50?mL?容量瓶，以蒸餾水定容，供可溶性糖的測(cè)定。???????向沉淀中加蒸餾水?3?mL?，攪拌均勻，放入沸水浴中糊化?15?min?。冷卻后，加入?2?mL?冷的?9.2?mol/L?高氯酸，不時(shí)攪拌，提取?15?min?后加蒸餾水至?10?mL?，混勻，離心?10?min?，上清液傾入?50?mL?容量瓶。再向沉淀中加入?2?mL?4.6?mol/L?高氯酸，攪拌提取?15?min?
4、后加水至?10?mL?，混勻后離心?10?min?，收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀?1?～?2?次，離心，合并離心液于?50?mL?容量瓶用蒸餾水定容供測(cè)淀粉用。?3.?測(cè)定?取待測(cè)樣品提取液?1.0?mL?于試管中，再加蒽酮試劑?5?mL?，快速搖勻，然后在沸水浴中煮?10?min?，取出冷卻，在?620?nm?波長(zhǎng)下，用空白調(diào)零測(cè)定光密度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出淀粉含量（?mg?）。?四、結(jié)果計(jì)算?：含量（%）=100*C*VT/V1*1000*W式中：?C?——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得淀粉量，?mg?。?V?T?——樣品提取液總體積?,?mL?。?V?1?——顯色時(shí)取樣品液量，?mL?。?W?——樣品
5、重，?g?。?0.9?——由葡萄糖換算為淀粉的系數(shù)。?Ⅱ?碘?-?淀粉比色法?一、原理?對(duì)于淀粉含量較少的植株樣品，也可采用碘–淀粉比色法。淀粉在加熱情況下能溶于硝酸鈣溶液中，當(dāng)?shù)饣浐拖跛徕}共存時(shí)，碘能以碘–淀粉藍(lán)色化合物沉淀全部淀粉。將此沉淀溶于堿液，并在酸性條件下與碘作用形成藍(lán)色溶液進(jìn)行比色。?二、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器設(shè)備?（一）實(shí)驗(yàn)材料?任何植物材料。?（二）試劑?1?．?80?％硝酸鈣溶液。?2?．?0.5?％碘液：稱?5.00?g?結(jié)晶碘和?10.00?g?碘化鉀，放入研缽混合干研，然后加?10?mL?蒸餾水研至全部碘溶解，將溶液全部轉(zhuǎn)入?1000?mL?容量瓶定容后，貯于磨口試
6、劑瓶。?
3?．?5?％含碘硝酸鈣溶液：取?10?mL?80?％的硝酸鈣溶液，加入?160?mL?水再加入?3?mL?0.5?％的碘液混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。?4?．標(biāo)準(zhǔn)淀粉溶液：稱取純淀粉?50?mg?于研缽中，加?3?mL?80?％硝酸鈣溶液，研細(xì)并轉(zhuǎn)移到?100?mL?的三角瓶中，用?15?mL?80?％的硝酸鈣溶液沖洗研缽，無(wú)損地收集于三角瓶中。將三角瓶置于沸水浴中煮沸?5?min?，冷卻后全部轉(zhuǎn)入?50?mL?容量瓶中并定容。此液為?1?mg/mL?的淀粉標(biāo)準(zhǔn)液。?5?．?0.1?mol/L?NaOH?。?6?．?0.1?mol/L?HCl?。?（三）儀器設(shè)備分析天平，研缽，容量瓶，
7、量筒，三角瓶，水浴，小漏斗，電爐，離心機(jī)，離心管，試劑瓶。三、實(shí)驗(yàn)步驟?1?．稱取?1?～?3?g?葉片，剪碎放入研缽，加?5?mL?80?％的硝酸鈣溶液，研磨成糊狀移入?100?mL?的三角瓶中，用?10?mL?80?％的硝酸鈣沖洗研缽，無(wú)損地收集于三角瓶中，瓶口蓋上小漏斗，在沸水浴上煮沸?3?～?5?min?（葉片含淀粉少的?3?min?，含淀粉多的?5?min?），使樣品中淀粉轉(zhuǎn)變?yōu)槟z體溶液。?2?．給
