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1、實(shí)驗(yàn)14植物組織中淀粉含量的測(cè)定?Ⅰ蒽酮硫酸法一、原理淀粉是由葡萄糖殘基組成的多糖，在酸性條件下加熱使其水解成葡萄糖，然后在濃硫酸的作用下，使單糖脫水生成糠醛類化合物，利用蒽酮試劑與糠醛化合物的顯色反應(yīng)，即可進(jìn)行比色測(cè)定。二、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器設(shè)備（一）實(shí)驗(yàn)材料任何植物材料。（二）試劑??濃硫酸（比重1.84）。??9.2mol/LHClO4。??蒽酮試劑，同實(shí)驗(yàn)24。（三）儀器設(shè)備電子天平，容量瓶：100mL4個(gè)、50mL2個(gè)，漏斗，小試管若干支，電爐，刻度吸管0.5mL1支、2.0mL3支、
2、5mL4支，分光光度計(jì)，記號(hào)筆。三、實(shí)驗(yàn)步驟1.標(biāo)準(zhǔn)曲線制作同實(shí)驗(yàn)24恩酮法。2.樣品提取稱取50～100mg粉碎過(guò)100目篩的烘干樣品，置于15mL刻度試管中，加入6～7mL80％乙醇，在80℃水浴中提取30min，取出離心（3000rpm）5min，收集上清液。重復(fù)提取兩次（各10min）同樣離心，收集三次上清液合并于燒杯，置于85℃恒溫水浴，使乙醇蒸發(fā)至2～3mL，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，以蒸餾水定容，供可溶性糖的測(cè)定。向沉淀中加蒸餾水3mL，攪拌均勻，放入沸水浴中糊化15min。冷卻后，加入
3、2mL冷的9.2mol/L高氯酸，不時(shí)攪拌，提取15min后加蒸餾水至10mL，混勻，離心10min，上清液傾入50mL容量瓶。再向沉淀中加入2mL4.6mol/L高氯酸，攪拌提取15min后加水至10mL，混勻后離心10min，收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀1～2次，離心，合并離心液于50mL容量瓶用蒸餾水定容供測(cè)淀粉用。3.測(cè)定取待測(cè)樣品提取液1.0mL于試管中，再加蒽酮試劑5mL，快速搖勻，然后在沸水浴中煮10min，取出冷卻，在620nm波長(zhǎng)下，用空白調(diào)零測(cè)定光密度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出糖含量
4、（μg）。?四、結(jié)果計(jì)算式中：C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得葡萄糖量，μg。VT——樣品提取液總體積,mL。V1——顯色時(shí)取樣品液量，mL。W——樣品重，g。0.9——由葡萄糖換算為淀粉的系數(shù)。?Ⅱ碘-淀粉比色法一、原理對(duì)于淀粉含量較少的植株樣品，也可采用碘–淀粉比色法。淀粉在加熱情況下能溶于硝酸鈣溶液中，當(dāng)?shù)饣浐拖跛徕}共存時(shí)，碘能以碘–淀粉藍(lán)色化合物沉淀全部淀粉。將此沉淀溶于堿液，并在酸性條件下與碘作用形成藍(lán)色溶液進(jìn)行比色。二、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器設(shè)備（一）實(shí)驗(yàn)材料任何植物材料。（二）試劑1．80％硝酸
5、鈣溶液。2．0.5％碘液：稱5.00g結(jié)晶碘和10.00g碘化鉀，放入研缽混合干研，然后加10mL蒸餾水研至全部碘溶解，將溶液全部轉(zhuǎn)入1000mL容量瓶定容后，貯于磨口試劑瓶。3．5％含碘硝酸鈣溶液：取10mL80％的硝酸鈣溶液，加入160mL水再加入3mL0.5％的碘液混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。4．標(biāo)準(zhǔn)淀粉溶液：稱取純淀粉50mg于研缽中，加3mL80％硝酸鈣溶液，研細(xì)并轉(zhuǎn)移到100mL的三角瓶中，用15mL80％的硝酸鈣溶液沖洗研缽，無(wú)損地收集于三角瓶中。將三角瓶置于沸水浴中煮沸5min，冷卻后全部轉(zhuǎn)入
6、50mL容量瓶中并定容。此液為1mg/mL的淀粉標(biāo)準(zhǔn)液。5．0.1mol/LNaOH。6．0.1mol/LHCl。（三）儀器設(shè)備分析天平，研缽，容量瓶，量筒，三角瓶，水浴，小漏斗，電爐，離心機(jī)，離心管，試劑瓶。三、實(shí)驗(yàn)步驟1．稱取1～3g葉片，剪碎放入研缽，加5mL80％的硝酸鈣溶液，研磨成糊狀移入100mL的三角瓶中，用10mL80％的硝酸鈣沖洗研缽，無(wú)損地收集于三角瓶中，瓶口蓋上小漏斗，在沸水浴上煮沸3～5min（葉片含淀粉少的3min，含淀粉多的5min），使樣品中淀粉轉(zhuǎn)變?yōu)槟z體溶液。2．給
7、三角瓶中加20mL蒸餾水，混合液轉(zhuǎn)入離心管中離心（2000～3000rpm）2～3min，將離心后的淀粉膠體渾濁液移入100mL容量瓶（淀粉含量少時(shí)，可移入50mL容量瓶），三角瓶及離心沉淀物用5～10mL熱蒸餾水沖洗并同樣離心，離心液并入容量瓶中（共洗2～3次）定容，即為淀粉提取液。3．取5～10mL淀粉待測(cè)液，加入到盛有2mL0.5％碘液的離心管中，混勻靜置15min后離心（3000rpm）5min，棄上清液。沉淀用5％的含碘硝酸鈣溶液沖洗兩次，向沖洗后的沉淀中加入10mL0.1mol/L的N
8、aOH混勻，將離心管浸入沸水內(nèi)5min，使沉淀溶解。將溶液轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，加入0.3mL0.5％碘液，用30mL左右的水沖洗并入容量瓶，加入2mL1mol/L的鹽酸，用水定容并顯色，在590nm波長(zhǎng)處測(cè)定光密度。4．繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線取標(biāo)準(zhǔn)淀粉溶液（1mg/mL）0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于6個(gè)離心管中，用80％硝酸鈣溶液將各管的體積補(bǔ)足至5mL，再向各管加入2mL0.5％碘液，混勻靜置15min后離心，其他操作同樣品測(cè)定步驟，顯色后在590nm波長(zhǎng)下測(cè)
