激光共聚焦顯微鏡原理 激光共聚焦顯微鏡的原理和應(yīng)用

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1、激光共聚焦顯微鏡原理激光共聚焦顯微鏡的原理和應(yīng)用?232?軍醫(yī)進修學院學報1996Sept;17(3)激光共聚焦顯微鏡的原理和應(yīng)用李　楠　王黎明　楊　軍關(guān)鍵詞　激光;顯微鏡;原理和作用中國圖書資料分類法分類號　R318.51的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖象是標本的光學橫斷面,克服了普通顯微鏡圖象模糊的缺點。在顯微鏡的載物臺上加一個微量步進馬達,可使載物臺上下步進移動,最小步進距離為的0.19激光共聚焦顯微鏡原理激光共聚焦顯微鏡的原理和應(yīng)用?2

2、32?軍醫(yī)進修學院學報1996Sept;17(3)激光共聚焦顯微鏡的原理和應(yīng)用李　楠　王黎明　楊　軍關(guān)鍵詞　激光;顯微鏡;原理和作用中國圖書資料分類法分類號　R318.51的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖象是標本的光學橫斷面,克服了普通顯微鏡圖象模糊的缺點。在顯微鏡的載物臺上加一個微量步進馬達,可使載物臺上下步進移動,最小步進距離為的0.19激光共聚焦顯微鏡原理激光共聚焦顯微鏡的原理和應(yīng)用?232?軍醫(yī)進修學院學報1996Sept;17(3)激

3、光共聚焦顯微鏡的原理和應(yīng)用李　楠　王黎明　楊　軍關(guān)鍵詞　激光;顯微鏡;原理和作用中國圖書資料分類法分類號　R318.51的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖象是標本的光學橫斷面,克服了普通顯微鏡圖象模糊的缺點。在顯微鏡的載物臺上加一個微量步進馬達,可使載物臺上下步進移動,最小步進距離為的0.19激光共聚焦顯微鏡原理激光共聚焦顯微鏡的原理和應(yīng)用?232?軍醫(yī)進修學院學報1996Sept;17(3)激光共聚焦顯微鏡的原理和應(yīng)用李　楠　王黎明　楊　軍關(guān)鍵

4、詞　激光;顯微鏡;原理和作用中國圖書資料分類法分類號　R318.51的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖象是標本的光學橫斷面,克服了普通顯微鏡圖象模糊的缺點。在顯微鏡的載物臺上加一個微量步進馬達,可使載物臺上下步進移動,最小步進距離為的0.19m,則細胞或組織各個橫斷面的圖象都能清楚地顯示,實現(xiàn)了“光學切片”的目的,這就是“細胞CT”名稱的由來。1.2　激光共聚焦顯微成像儀的圖像處理功能1.2.1　“細胞CT”功能　通過狹縫掃描技術(shù)將我們對細胞的研

5、究由多層迭加影像推進到真正的平面影像水平,使圖像更加清晰,從而為分子細胞生物學的深入研究拓寬了視野。1.2.2　三維成像與細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)圖像相結(jié)合的功能　激光共聚焦顯微成像儀可以將斷層圖像與三維重建圖像有機的結(jié)合起來,不但能揭示細胞內(nèi)部的結(jié)構(gòu)和提供細胞的長、寬、厚、斷層面積、細胞體積等參數(shù),而且可以給人以三維立體的概念。例如:可以使細胞旋轉(zhuǎn)起來從而能隨意觀察細胞各個側(cè)面的表面結(jié)構(gòu)。1.2.3　將形態(tài)學、生理學與分子細胞生物學的研究相互結(jié)合　利用激光共聚集顯微成像儀不但可以觀察細胞形態(tài)的動態(tài)變化,而且用適當?shù)臒晒馓?/p>

6、針可以觀察細胞內(nèi)部的生物化學變化。如細胞內(nèi)游離Ca2+、pH值及其它細胞內(nèi)離子的實時測定。熒光原位雜交的雜交點觀測和定量分析。1.3　激光共聚焦顯微成像儀的細胞生物學功能1.3.1　粘附細胞分選技術(shù)　Ultima型激光共聚焦顯微成像儀是目前世界上唯一能對粘附細胞進行分選的儀器,而這種不改變細胞周圍培,　　激光共聚焦顯微鏡是80年代發(fā)展起來的一項劃時代意義的高科技新產(chǎn)品,它是在熒光顯微鏡成像基礎(chǔ)上加裝了激光掃描裝置,利用計算機進行圖象處理,使用紫外或可見光激發(fā)熒光探針,從而得到細胞或組織內(nèi)部微細結(jié)構(gòu)的熒光圖象,在

7、亞細胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值,膜電位等生理信號及細胞形態(tài)的變化,成為形態(tài)學,分子細胞生物學,神經(jīng)科學,藥理學,遺傳學等領(lǐng)域中新一代強有力的研究工具。1994年在姜泗長院士的提議下,我院引進了目前世界上檔次最高,功能最全的美國Meridian公司的產(chǎn)品:Acas系列Ultima型和掃描速度最快的Insight型兩臺激光共聚焦儀。儀器自1995年5月份到貨安裝以來,已為我院7個科室的10個課題所應(yīng)用,目前主要開展的研究內(nèi)容有:(1)細胞內(nèi)游離鈣的實時監(jiān)測;(2)細胞通訊的研究;(3)細胞形態(tài)學的研究。1　基

8、本原理和功能1.1　基本原理　傳統(tǒng)的光學顯微鏡使用的是場光源,標本上每一點的圖象都會受到鄰近點的衍射光或散射光的干擾;激光共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點光源對標本內(nèi)焦平面上的每一點掃描,標本上的被照射點,在探測針孔處成像,由探測針孔后的光電倍增管9(PMT)或冷電耦器件(cCCD)逐點或逐線接收,迅速在計算機監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖象。照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛,軍