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1、HBsAg陰性孕婦乙型肝炎病毒宮內(nèi)感染檢測(cè)分析作者：馮慧芳，王永莉，伍業(yè)星【關(guān)鍵詞】,乙型肝炎表面抗原；乙型肝炎病毒；垂直傳播 ［摘 要］目的：探討使用熒光定量PCR方法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陰性孕婦乙型肝炎病毒(HBV)宮內(nèi)感染情況。方法：選擇住院分娩的HBsAg陰性孕婦，使用熒光定量PCR方法檢測(cè)孕婦及其新生兒的血清中HBVDNA。結(jié)果：502例HBsAg陰性孕婦血清HBVDNA陽(yáng)性40例，其中27例發(fā)生宮內(nèi)感染，宮內(nèi)感染總陽(yáng)性率5.38％。以HBeAb+HBcAb+組合模式的
2、宮內(nèi)感染率最高，達(dá)12．50％，而HBVM全陰性者發(fā)生宮內(nèi)感染率最低，為1．10％。結(jié)論：HBsAg陰性孕婦也可能發(fā)生HBV宮內(nèi)感染，采用靈敏度高的熒光定量PCR方法檢測(cè)HBsAg陰性孕婦及新生兒血清中HBVDNA，對(duì)發(fā)現(xiàn)其HBV宮內(nèi)感染有重要意義?！ 。坳P(guān)鍵詞］乙型肝炎表面抗原；乙型肝炎病毒；垂直傳播5 乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界性分布，我國(guó)是HBV感染的高流行區(qū)，慢性感染者有一億多人［1］。慢性攜帶HBV的孕婦作為傳染源意義很重要，該人群可引起HBV母嬰垂直傳播和水平傳播。以往認(rèn)為乙
3、型肝炎表面抗原(HBsAg)陰性者處于恢復(fù)期，無(wú)傳染性，但隨著臨床檢驗(yàn)水平的提高，特別是PCR技術(shù)的日趨成熟并廣泛使用，發(fā)現(xiàn)這部分人群中有相當(dāng)一部分人血清中可檢測(cè)到HBVDNA，因而推測(cè)HBsAg陰性孕婦有可能存在“隱匿性HBV感染”，并可以造成HBV母嬰傳播。本研究采用熒光定量PCR方法檢測(cè)HBsAg陰性孕婦及其新生兒血清HBVDNA，了解這部分孕婦HBV宮內(nèi)感染情況。 1 對(duì)象與方法 1．1 對(duì)象 選取2002年1月至2005年12月，在本院住院分娩的孕婦，經(jīng)酶
4、聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)乙型肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物(HBVM)中HBsAg陰性孕婦及其新生兒各502例，所有孕婦無(wú)肝炎癥狀及體征，并排除其他病毒(如：丙型肝炎病毒、人類(lèi)免疫缺陷病毒等)感染?！ ?．2 標(biāo)本采集 孕婦分娩前、新生兒出生后注射乙型肝炎疫苗前抽取靜脈血，分離血清保存?zhèn)錂z?！ ?．3 試劑和方法 5 PCR試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因診斷中心提供，標(biāo)本處理及實(shí)驗(yàn)均按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，PCR儀由美國(guó)生產(chǎn)的ABI7000熒光定量基因擴(kuò)增分
5、析儀?！ ?．4 診斷標(biāo)準(zhǔn) HBVDNA拷貝數(shù)＞1×103copy/ml為陽(yáng)性?！ ? 結(jié)果 502例HBsAg陰性孕婦中，血清標(biāo)本HBVDNA陽(yáng)性40例，發(fā)生HBV宮內(nèi)感染27例，宮內(nèi)感染率5．38％，其中以HBeAb+HBcAb+模式的孕婦發(fā)生宮內(nèi)感染率最高，達(dá)12．50％，而HBVM全陰性的孕婦，仍有發(fā)生HBV宮內(nèi)感染，宮內(nèi)感染率為1．10％，具體情況見(jiàn)表1。表1 各種宮內(nèi)感染的具體情況（略） 3 討論 HBsAg陰性孕婦HBV感染的可能性。經(jīng)ELISA方法
6、檢測(cè)血清HBsAg陰性也不能完全排除HBV感染，HBsAg陰性孕婦HBV感染是一個(gè)不容忽視的問(wèn)題。有文章顯示，在HBsAg陰性的“健康”5人群血清中可檢測(cè)到HBVDNA［2］。在一般HBsAg陰性人群中確實(shí)存在HBV感染，這樣的HBV隱匿性感染可能與下列因素有關(guān)：HBV基因變異，如S基因變異：S基因中個(gè)別氨基酸被替代或短小缺失，影響HBsAg的表達(dá)或改變HBsAg的抗原性。HBV復(fù)制水平相對(duì)較低，血清中復(fù)制型HBV水平低，造成HBsAg在血清中水平低下，而使用ELISA方法檢測(cè)HBsAg的敏感性
7、相當(dāng)于3×107病毒/ml，而PCR方法的敏感性達(dá)3×102～3病毒/ml，提高了近百萬(wàn)倍［3］。宿主因素：HBV在感染的肝細(xì)胞中基因表達(dá)減少，也可能因病毒顆粒組裝或分泌改變，抑制肝細(xì)胞的分泌，或HBsAg隱藏在免疫復(fù)合物中而未能檢出。HBsAg陰性孕婦HBV感染與宮內(nèi)傳播。本研究采用熒光定量PCR方法檢測(cè)HBsAg陰性孕婦血清HBVDNA，顯示502例HBsAg陰性孕婦中HBVDNA陽(yáng)性40例，這說(shuō)明了，雖然ELISA方法檢測(cè)血清HBsAg陰性，但仍有相當(dāng)一部分孕婦血清有HBV存在。有文章報(bào)道
8、：即使HBsAg陰性、HBsAb陽(yáng)性，肝組織中仍可存在HBV［1］。由于HBsAg陰性孕婦有存在HBV感染的可能，因而可導(dǎo)致HBV母嬰垂直傳播。本研究顯示，502名HBsAg陰性孕婦中，有27人發(fā)生宮內(nèi)感染，宮內(nèi)感染率達(dá)5．38％，由此可見(jiàn)，血清HBsAg陰性而HBVDNA陽(yáng)性孕婦發(fā)生宮內(nèi)感染的機(jī)會(huì)很大。母體血中HBVDNA陽(yáng)性是造成HBV母嬰垂直傳播的主要因素，而垂直傳播是HBV的重要傳播途徑，不僅造成眾多的慢性HBV攜帶者，也是引起人慢性乙型肝炎、肝硬化以及肝癌的重要因素。因此，使用靈敏度高
