sirna沉默annexin1基因?qū)Π螂装﹖24細(xì)胞順鉑耐藥的影響

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1、siRNA沉默Annexin1基因?qū)Π螂装㏕24細(xì)胞順鉑耐藥的影響作者：高琳楊遠(yuǎn)航徐萬海林相國李建章楊德君王曉民【摘要】　　目的觀察RNA干擾沉默膜聯(lián)蛋白1(Annexin1)基因表達(dá)技術(shù)對膀胱癌T24細(xì)胞Annexin1基因表達(dá)和順鉑耐藥的影響。方法針對Annexin1基因不同部位設(shè)計并化學(xué)合成3對不同的靶向小分子干擾RNA(siRNA),脂質(zhì)體介導(dǎo)瞬時轉(zhuǎn)染膀胱癌T24細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后應(yīng)用半定量RTPCR和Western印跡檢測Annexin1mRNA和蛋白的改變，用MTT法檢測沉默Annexin1表達(dá)在

2、膀胱癌T24細(xì)胞對順鉑敏感性的變化。結(jié)果轉(zhuǎn)染siRNA后膀胱癌T24細(xì)胞Annexin1的mRNA和蛋白水平顯著下降(P＜0.05），增強細(xì)胞對順鉑的敏感性(P＜0.05）。結(jié)論RNA干擾Annexin1基因后其mRNA和蛋白水平顯著下降，并且增強T24細(xì)胞對順鉑的敏感性?！娟P(guān)鍵詞】膀胱癌；膜聯(lián)蛋白1；siRNA；順鉑【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectsofannexin1genesilencingbysmallinterferingRNA(siRNA)onbladder

3、cancercellsT24andthesensitivitychangeofDDP.MethodsThreesiRNAtargetingthreedifferentdomainsofannexin1geneweredesigned,synthesized,andtransfectedintobladdercancerT2413cellsbylipofectamineTM2000.Aftertransfection,expressionofannexin1wasdetectedbyRTPCRandWestblo

4、tting.ThecellularsensitivitytoDDPwasevaluatedbyMTTassay.ResultsComparedwiththenegativecontrol(siRNANC)groups,transfectionofthreetargetingsiRNAinT24cellsdecreasedtheexpressionofannexin1mRNAandprotein.Annexin1genesilencingincreasedthesensitivityofT24cellstoDDP.

5、ConclusionsThechemicallysynthesizedspecificsiRNAtargetingannexin1couldeffectivelyreducetheexpressionofannexin1gene,increasethesensitivityofT24cellstoDDP.【Keywords】Bladdercancer;Annexin1;siRNA;DDP　　膜聯(lián)蛋白1(Annexin1)是上皮生長因子（EGFR）激酶的主要底酶，糖皮質(zhì)激素刺激其產(chǎn)生和活性。Annexin1增

6、強感染局部的凋亡表明它對腫瘤的診斷和治療有重要意義，因此提出該蛋白質(zhì)與腫瘤細(xì)胞的活性調(diào)節(jié)相關(guān)〔1，2〕。Annexin1與膀胱癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究針對Annexin1基因mRNA序列設(shè)計合成與之互補的雙鏈小分子干擾RNA（siRNA），在脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染膀胱癌T24細(xì)胞系，觀察對Annexin1基因mRNA和蛋白表達(dá)及對順鉑敏感性的變化?！　?材料與方法13　　1.1材料　　1.1.1細(xì)胞株　　膀胱癌T24細(xì)胞株?！　?.1.2主要試劑　　RNA干擾試劑盒(SilencerTMsiRNAConstruct

7、ionKit)購自美國Ambion公司。陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑盒LipofectamineTM2000、Trizol、MMLV購自Invitrogen生命技術(shù)公司。RPMI1640、IMDM、胰蛋白酶購自Gibco公司?！　?.2方法　　1.2.1siRNA的設(shè)計及合成　　根據(jù)基因庫中Annexin1基因序列（GenBankAccessionNo.NM000700）和siRNA設(shè)計原則，應(yīng)用Ambion生物公司的設(shè)計軟件(siRNATargetFinderandDesignTools），自Annexin1mRNA的

8、起始密碼子開始，尋找“AA”二連序列，記下其3′13端的19個堿基序列作為候選的siRNA靶序列。將候選序列在基因庫中用Blast軟件進(jìn)行同源序列搜索，排除那些和其他基因編碼序列或基因表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)同源的候選序列。最終選擇了3段21個堿基的siRNA序列（TⅠ、TⅡ、TⅢ），分別靶向Annexin1基因的240260(