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《臨床醫(yī)學(xué)畢業(yè)論文sirna沉默annexin1 基因?qū)Π螂装﹖24細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.doc》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、XX大學(xué)畢業(yè)論文siRNA沉默Annexin1基因?qū)Π螂装㏕24細(xì)胞生物學(xué)特性姓名：2014年6月25日siRNA沉默Annexin1基因?qū)Π螂装㏕24細(xì)胞生物學(xué)特性的影響作者：高琳楊遠(yuǎn)航1徐萬海林相國李建章楊徳君王曉民【摘要】R的觀察RNA干擾技術(shù)沉默Annexin1基因表達(dá)對膀胱癌T24細(xì)胞增殖能力的影響。方法針對Annexin1基因不同部位設(shè)計(jì)并化學(xué)合成3對不同的靶向小干擾RNA(siRNA),脂質(zhì)體介導(dǎo)瞬吋轉(zhuǎn)染膀胱癌T24細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后應(yīng)用半定量RTPCR和Western印跡法檢測Annexin1mRNA和蛋白的改變，透射電鏡觀察細(xì)胞凋亡情況，用MTT法檢測沉默Annexi
2、n1表達(dá)對膀胱癌T24細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果轉(zhuǎn)染siRNA后膀胱癌T24細(xì)胞Annexin1mRNA和蛋白水平顯著下降(P0.05),轉(zhuǎn)染siRNA沉默Annexin1基因表達(dá)后膀胱癌T24細(xì)胞出現(xiàn)典型凋亡細(xì)胞，增殖能力顯著下降(P0.05)o結(jié)論RNAT擾Annexin1基因后其mRNA和蛋口水平顯著下降，誘導(dǎo)了膀胱癌T24細(xì)胞凋亡，并且抑制細(xì)胞的增殖?！娟P(guān)鍵詞】膀胱癌;Annexin1;siRNA[Abstract]ObjectiveToexploretheeffectsofAnnexin1genesilencingbysmallinterferingRNA(siRNA)onb
3、laddercancercellsT24invitro.MethodsThreesiRNAtargetingthreedifferentdomainsofAnnexin1geneweredesigned,synthesized,andtransfectedintobladdercancerT24cellsbylipofcctamincTM2000.Aftertransfection,expressionofAnnexin1wasdetectedbyRTPCRandWesternblotting.Transmissionelectronicmicroscope(TEM)wasapp
4、liedtoobservetheapoptosiscellularmorphology.ThecellularproliferationinhibitoryratiowasevaluatedbyMTTassay.ResultsComparedwiththenegativecontrol(siRNANC)groups,transfectionofthreetargetingsiRNAinT24cellsdecreasedtheexpressionofAnnexin1mRNAandprotein.Annexin1genesilencingreducedtheproliferative
5、capacityofT24cellsandleadedtotumorcellsapoptosisaftertransfection.ConclusionsThechemicallysynthesizedspecificsiRNAtargetingAnnexin1couldeffectivelyreducetheexpressionofAnnexin1gene,reducetheproliferativecapacityofT24cellsandinducetumorcellsapoptosis.【Keywords]Bladdercancer;Annexin1;siRNA膜聯(lián)蛋白l
6、(Arniexin1)增強(qiáng)感染局部的凋亡表明它對腫瘤的診斷和治療有重要意義，因此該蛋白質(zhì)與腫瘤細(xì)胞的活性調(diào)節(jié)相關(guān)〔1,2)。FI前,Annexin1的表達(dá)缺失是否與膀胱癌細(xì)胞的杲常增殖潛力相關(guān)以及對化療約物的敏感性尚未明了,本研究利用RNA干擾(RNAi)技術(shù)通過沉默Annexin1基因直接觀察Annexin1表達(dá)缺失對膀胱癌細(xì)胞體外增殖能力的影響，為進(jìn)一?步揭示該基因促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的機(jī)制提供理論依據(jù)。1材料與方法1.1材料膀胱癌T24細(xì)胞株(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院屮心實(shí)驗(yàn)室提供),RNA干?擾試劑盒(SilencerTMsiRNAConstructionKit)購自美國Amb
7、ion公司。陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑盒LipofectamineTM2000>Trizol>MMLV購自Invitrogen生命技術(shù)公司。RPMI1640、IMDM、胰蛋白酶購0GIBC0公司。1.2小干擾RNA⑸RNA)的設(shè)計(jì)及合成根據(jù)GenBank111Annexin1基因序列(GenBankAccessionNo.NM000700)和siRNA設(shè)計(jì)原則，應(yīng)用Ambion生物公司的設(shè)計(jì)軟件(siRNATargetFinderandDesignTools),自Annexin1mRN
