資源描述：
《人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外成軟骨誘導(dǎo)研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外成軟骨誘導(dǎo)研究【摘要】目的：研究人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymalstemcells,MSCs）在體外培養(yǎng)過程中的增殖和成軟骨分化現(xiàn)象和規(guī)律。方法：以密度梯度離心法分離健康成人髂骨MSCs，觀察體外培養(yǎng)過程中細(xì)胞形態(tài)、生長和增殖現(xiàn)象。取第三代細(xì)胞給予地塞米松，維生素C和不同劑量轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1）行成軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)。3周后行阿利新藍(lán)及甲苯胺藍(lán)染色蛋白多糖，免疫熒光檢測II型膠原，阿利新藍(lán)比色法檢測葡萄糖氨基聚糖。結(jié)果：體外培養(yǎng)條
2、件下MSCs生長旺盛。在TGF-β1作用下MSCs向軟骨骨細(xì)胞分化，TGF-β110μg/L組軟骨細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)最強(qiáng)。結(jié)論：MSCs有旺盛的增殖能力。MSCs在一定誘導(dǎo)條件下可以向軟骨細(xì)胞分化，轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）是誘導(dǎo)MSCs向軟骨分化的關(guān)鍵性因素，10μg/L是其最佳誘導(dǎo)劑量。【關(guān)鍵詞】骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;成軟骨;轉(zhuǎn)化生長因子β1 ?。跘bstract］Objective:Toresearchthephenomenonandruleofmultiplicationandchondrogenesisofmes
3、enchymalstemcells(MSCs)derivedfromhumanbonemarrowinvitro.Methods：Healthyadult′sMSCswereisolatedfromIliumandpurifiedbydensitygradient.Toobservetheconformation,growthandmultiplicationofMSCsculturedinvitro.Wechosethepassage143MSCsandinducedthemintochondrogenicdiffer
4、entiationwithDexamethasone，VitaminCandTGF-β1indifferentdosageformedchondracytesinduction.After3weeks,wemeasuredthesulfateglycosaminoglycanwithtoluidineblueandalcianblue,typeⅡcollagenwithimmunofluorescenceandglycosaminoglycanwithalcianbluecolorimetry.Results：MSCsc
5、anbeculturedwellinvitro.MSCswereinducedintochondrocytesbyTGF-β1andTGF-β110μg/Lgrouphadthemostevidentexpression.Conclusion：MSCshavestrongabilityofmultiplicationandcouldbeinducedintochondrocytesundercertaincircumstances.TGF-β1isthemajorfactorofchondrogenesiswhile10
6、μg/Listhebestinducingdosage. ?。跭eywords］mesenchymalstemcells;chondrogenesis;TGF-β1 各種由創(chuàng)傷和疾病引起的關(guān)節(jié)軟骨缺損在臨床上十分常見,目前臨床上尚無有效的治療方法。近年來組織工程技術(shù)的發(fā)展給修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損帶來了希望。最近的比較研究證實(shí)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymalstemcells,MSCs)是修復(fù)全層軟骨缺損的最佳細(xì)胞源［1］。筆者采集健康人骨髓，以密度梯度離心法分離人MSCs，行體外培養(yǎng)擴(kuò)增及成軟骨誘導(dǎo)，希望為臨床治療軟
7、骨缺損提供參考。14 1材料與方法 1.1對象 骨髓標(biāo)本取自3名健康成年男性自愿者（28，34，37歲）髂后上棘。3人均無全身性疾病和代謝性疾病。取得知情同意后，無菌條件下抽取骨髓5ml置于抗凝環(huán)境。 1.2主要試劑 L-DMEM培養(yǎng)基（Gibco公司），類標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清（民海生物公司），轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）-β1（美國Peprotech公司），維生素C、地塞米松、胰蛋白酶、硫酸軟骨素（Sigma公司），人淋巴細(xì)胞分離液Ficoll（天津灝洋生物公司），兔抗人二型膠原多克隆抗體、濃縮型Cy3-SABC免疫熒光試
8、劑盒（博士德公司）?！ ?.3人MSCs的分離和體外培養(yǎng) 取2.5ml骨髓加入等量PBS稀釋，吹打混勻，貼壁緩慢加入已有5mlFicoll分離液的離心管。2000r/min離心20min，吸取界面云霧狀白膜層（富含MSCss）。加入PBS,800r/min離心1014min洗滌2遍，計數(shù)。以5×106/cm2接種于
