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1、成骨誘導后骨髓間充質干細胞與A：王巖松,劉丹平,周大利，梅晰凡【摘要】 目的研究多孔磁性硅灰石/磷灰石玻璃陶瓷載體A-GC支架（apatite-agicglassceramic,A-GC）作為組織工程骨支架的可行性。方法體外培養(yǎng)兔骨髓間充質干細胞，在成骨誘導劑地塞米松等的誘導下，向成骨細胞轉化，并使之與修飾后A-GC支架復合，通過倒置相差顯微鏡和掃描電子顯微鏡觀察細胞貼附情況。結果地塞米松等誘導組細胞形態(tài)向類成骨細胞轉化，堿性磷酸酶表達明顯增高，并表達Ⅰ型膠原。A-GC支架具有合適的微孔結構，材料大孔孔徑為300～400μm,且孔道相互貫通，體外復合培養(yǎng)10小時，成骨細胞即開始貼附于支
2、架上，復合培養(yǎng)7天，成骨細胞在支架上分化增殖，分泌細胞外基質。結論適當濃度成骨誘導劑可成功的將兔BMSCS成骨細胞誘導，修飾后A-GC支架是骨組織工程的良好載體?！娟P鍵詞】骨髓間充干質細胞成骨誘導A-GC載體生物相容性 Abstract:ObjectiveToinvestigatethefeasibilityofapatite-agicglassceramic(A-GC)asscaffoldmaterialinbonetissueengineering.MethodsThepurifiedbonemarroalcellsrabbitethasone,β-glycerophophatea
3、ndVitaminCandco-culturedodifiedA-GCinvitro.Thecell-meterialplexicroscopeandelectronicscanningmicroscopeinordertoevaluatetheinteractionbetoftheinducedcellsbyDexamethasoneacroporousstructure:thesizeofmacroporesindiameter,andporesinterconnectedeachother.Tenhoursafterco-culture,theosteoblastsadheredt
4、oA-GCscaffolds.Sevendayslater,theosteoblastsdifferentiatedandproliferatedinA-GCatrixongosteoblasts.ConclusionsRabbitbonemarroalcellscanbeinducedintomarroalosteoblastsbysuitablecontentsofdexamethasone.ModifiedA-GCisagoodscaffoldmaterialforthebonetissueengineering. Keyarroalcells;osteoblastsinduct
5、ion;apatite-agicglassceramic;biopatibility 骨缺損修復一直是骨科臨床的棘手問題，目前常用的修復方法均存在一定的缺點，難以滿足臨床需要。組織工程骨再造被認為是最有前景的骨缺損治療修復方法。在一定誘導條件下，可使BMSCs向成骨細胞分化的數(shù)目大大增加［1,2］，表明其具有很強的成骨潛能，是應用最為廣泛的種子細胞。細胞與支架材料的相互作用是組織工程研究的主要領域,細胞與材料的粘附是基礎,細胞必須與材料發(fā)生適當?shù)恼掣讲拍苓M行遷移、分化和增殖?！ 我坏牟牧想y以滿足骨組織工程細胞外支架材料的要求，只有通過合適的方法將幾種材料組合，在性能上互相取長補短
6、，形成復合支架材料［3］。ASCS接近90%時，以0.25%胰蛋白酶消化，離心，棄上清，制成細胞懸液，細胞計數(shù)，按1×105/瓶接種，每日在倒置相差顯微鏡下觀察?！ ?.2.2兔BMSCs的成骨誘導及鑒定：細胞傳至第3代后，進行成骨誘導,實驗分誘導組和非誘導組，誘導液為10-8mol/L地塞米松,10mmol/Lβ-甘油磷酸鈉和50mg/L維生素C,倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化，分別在適當?shù)臅r間測定堿性磷酸酶含量、Ⅰ型膠原的表達情況、Vonkossa染色。 堿性磷酸酶含量測量0.25％胰蛋白酶消化細胞后，細胞計數(shù)，以2000個/孔的密度接種于5塊96孔培養(yǎng)板上。實驗分2組：誘導組和
7、非誘導組；每組10孔，每3天換液，于第4、6、8、10、12天分別取出1塊培養(yǎng)板，經(jīng)0.5%TritonX-100處理后，4℃冰箱過夜，用酶標分析儀測堿性磷酸酶含量?！ 、裥湍z原的表達檢測0.25％胰蛋白酶消化細胞后，細胞計數(shù)，以1×104個/孔的密度接種于24孔培養(yǎng)板。培養(yǎng)板內置預先經(jīng)多聚賴氨酸防脫片處理的蓋玻片，每3天換液。實驗分組同前，于第15天應用原位雜交技術檢測各組Ⅰ型膠原的表達情況。 鈣結節(jié)Vonkossa染色誘導15
