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1、反義寡核苷酸抑制大鼠損傷視神經(jīng)Nogo-AmRNA的表達(dá)作者:袁容娣 葉劍 彭錫嘉 劉少章【摘要】 目的:觀察反義寡核苷酸對損傷視神經(jīng)Nogo-A的影響。方法:實驗分為對照組、隨機(jī)序列組、和2,5,10μmol/L3種Nogo-A反義寡核苷酸濃度組。大鼠視神經(jīng)鉗夾傷后,采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR),半定量分析反義寡核苷酸對損傷視神經(jīng)Nogo-AmRNA表達(dá)量的變化。結(jié)果:反義寡核苷酸均顯著降低Nogo-AmRNA的表達(dá)(P<0.01),隨機(jī)序列對Nogo-AmRNA的表達(dá)無影響(P>0.05)。結(jié)論:反義寡核苷酸對視神經(jīng)損傷后Nogo-A
2、mRNA表達(dá)有抑制作用?!娟P(guān)鍵詞】反義寡核苷酸 Nogo-A 視神經(jīng) 創(chuàng)傷 RT-PCR EffectsofantisenseoligodeoxynucleotidesonNogo-AmRNAexpressionininjuredopticnervesAbstractAIM:Toobservetheeffectsofantisenseoligodeoxynucleotides(ASODN)onNogo-AmRNAexpressionininjuredopticnerves.METHODS:Atotalof30ratsweredividedintofivegroup
3、s:controlgroup,randomsequencegroupandtest10groups(2μmol/L,5μmol/Land10μmol/LNogo-Aantisenseoligodeoxynucleotides).reversetranscriptase-polymerasechainreaction(RT-PCR)methodwasusedinthedetectionofthelevelsofNogo-AmRNAininjuredopticnerves.RESULTS:TheresultofRT-PCRshowedthatNogo-Aantisens
4、eoligodeoxynucleotidescouldsignificantlyinhibittheexpressonofNogo-AmRNA(P<0.01),randomsequenceantisenseoligodeoxynucleotideshadnonoticeableeffectonNogo-AmRNA.CONCLUSION:Nogo-AantisenseoligodeoxynucleotidescaninhibittheexpressonofNogo-AmRNAininjuredopticnerves.·KEYWORDS:antisenseolig
5、odeoxynucleotides;Nogo-A;opticnerve;injury;reversetranscriptase-polymerasechainreaction 0引言視神經(jīng)損傷是臨床常見的眼外傷,迄今仍缺乏有效的治療手段。研究證實,微環(huán)境中存在神經(jīng)生長抑制因子是成年中樞神經(jīng)再生能力低下的原因之一,中和或減少神經(jīng)生長抑制因子可以促進(jìn)成年哺乳動物RGCs軸突再生。Nogo-A是最具特征性的神經(jīng)生長抑制因子。2000年美國、英國、瑞士的3個實驗室[1-3]10同時報道Nogo基因成功克隆,它編碼3種蛋白(Nogo-A,-B,-C)。Nogo-A具有最強(qiáng)的
6、神經(jīng)生長抑制作用,其抗體IN-1可以中和這種抑制作用。研究表明[4],反義寡核苷酸對培養(yǎng)的視神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞Nogo-A的表達(dá)具有抑制作用,我們通過在體實驗研究反義寡核苷酸對損傷視神經(jīng)Nogo-A表達(dá)的影響。1材料和方法1.1材料8~10wkWistar雄性大鼠30只,體質(zhì)量200~250g,由第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所實驗動物中心提供,分為實驗組、隨機(jī)序列組及對照組,每組6只,3個實驗組分別用2,5,10μmol/L反義寡核苷酸10μL球后注射,對照組用注射用水10μL。硫代反義寡核苷酸序列為5-TGCTTTCGGTTGCTGAGGTA-3,濃度定為2μm
7、ol/L;同時設(shè)計一段隨機(jī)序列,其序列為5-GCAGACCAGCGCGGAGCT-3。經(jīng)基因庫檢索,Nogo-A反義核酸片段僅與Nogo-A有同源性,而隨機(jī)序列同所有基因均無同源性。由大連Takara公司進(jìn)行全硫代修飾(高純度級)。1.2方法10g/L戊巴比妥鈉0.8mL(30mg/kg)ip麻醉,暴露視神經(jīng),在球后2mm處用動脈夾夾持視神經(jīng)40s,致傷后按以上分組分別球后注射不同濃度的反義寡核苷酸或注射用水,隔24h給藥1次,共2次。傷后3d,斷頸處死大鼠,取傷側(cè)視神經(jīng)置于組織研磨器中研磨勻漿,-70℃凍存?zhèn)溆?。采用Trizol試劑提取視神經(jīng)總RNA。用DU-