正常血細(xì)胞形態(tài)觀察

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1、正常血細(xì)胞形態(tài)觀察實驗準(zhǔn)備一．器材：載玻片蓋玻片：滴管：4個橡皮吸頭：4個玻璃棒：4根燒杯：1000ml，2個量筒：100ml、500ml、1000ml各一蠟筆棕色小口瓶碾缽載玻片處理：一般將載玻片先用洗衣粉水溶液煮沸20分鐘，用流水沖洗，再經(jīng)清潔液浸泡過夜，用流水反復(fù)沖洗，最后入95%酒精浸泡約1小時。取出，以潔凈布巾夾持玻片邊緣擦干備用。二．試劑：瑞氏染液240ml瑞氏染料粉劑0.1g純甲醇（AR）60ml將粉劑放入潔凈干燥碾缽內(nèi)，先加少量甲醇研磨使染料溶解，然后將已溶解的染料倒入潔凈的棕色玻璃瓶內(nèi)，剩下未溶解的再加入

2、少量甲醇研磨，如此反復(fù)，直至染料完全溶解為止。新配制的染液需密封保存，室溫放置1周后才能使用。染料存放越久，染色效果越好。磷酸鹽緩沖液1%KH2PO430ml1%Na2HPO420ml加蒸餾水至800ml，調(diào)PH值到6.5~7.0，定容至1000ml。甲醇二甲苯實驗步驟一．涂片（一）血液涂片的制作（1）需載玻片2張，分別稱為玻片1和玻片2（推片）。（2）用玻片1一端接約3mm直徑的血滴，將此玻片1保持水平。（3）取另一邊緣平整的載玻片2（推片），將其前端放在血滴前，與片1保持30°角并稍向后移與血滴接觸，即見血液沿片2（推

3、片）下緣散開，使血液展開并充滿整個推片的寬度。（4）立刻將推片與載玻片呈30°角，邊輕壓推片邊將血液按下圖的箭頭方向推動涂抹，至血液鋪完血膜為止。（5）揮動片1使血膜吹干，用蠟筆將血膜邊緣圈畫備染色。（6）每只動物涂片一張。（7）一張良好的血片，要求厚薄適宜，頭、體、尾分明。（8）置30min～1hr后較利于觀察紅細(xì)胞的形態(tài)。注意事項：l如標(biāo)本本身太短，可觀察的部分會受局限，故以在離開載玻片另一端2cm地方涂抹為宜。l載玻片、推片的角度越小、血液越??；涂抹速度越慢、也越薄。在涂抹貧血病人的血液時，將推片稍豎起（不是30°而

4、是35°～40°左右），以較快的速度推比較好，而對紅細(xì)胞增高的病人則相反。l如用力過猛白細(xì)胞容易破損。二．染色（一）血液涂片的染色（1）將待染涂片平放于染色架上。（2）用滴管將染液滴于涂片上，覆蓋整張涂片，放置1～3分鐘。（3）加入等量的磷酸緩沖液或蒸餾水，與染液混勻，可以用滴管從一端吸入，另一端放出，混勻為止，或用嘴來回輕輕吹之，使之混勻，室溫下染色5～10分鐘（白細(xì)胞數(shù)多或骨髓標(biāo)本時間應(yīng)長一些，如20～30min）。（4）染色結(jié)束時，先用蒸餾水或緩沖液洗將涂片上的染液直接沖掉。（5）再將片子用自來水溫和沖洗，至血液膜呈

5、淡紅色。（6）甩干或晾干玻片。（7）封片。【染色原理】1．瑞氏染料是由酸性染料伊紅和堿性染料美藍(lán)組成的復(fù)合染料。美藍(lán)（又名亞甲藍(lán)mehylemeblue）為四甲基硫堇染料，通常為氯鹽，即氯化美藍(lán)。伊紅（又名曙紅eosin）通常為鈉鹽即伊紅化鈉。美藍(lán)和伊紅水溶液混合后產(chǎn)生一種憎液性膠體伊紅化美藍(lán)中性沉淀，即瑞氏染料。瑞氏染料溶于甲醇后重新解離為帶正電的美藍(lán)和帶負(fù)電的伊紅離子。2．細(xì)胞的染色既有物理性的吸附作用又有化學(xué)的親和作用，各種細(xì)胞和細(xì)胞的各種成分化學(xué)性質(zhì)不同對各種染料的親和力也不一樣，因此用染色液染色后在同一血片上可以

6、看見不同的色彩。例如：?血紅蛋白嗜酸性顆粒為堿性蛋白，與酸性染料伊紅結(jié)合染成粉紅色稱為——酸性物質(zhì)。?細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染藍(lán)色或紫色稱為——堿性物質(zhì)。?中性顆粒成等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染紫紅色稱為——中性物質(zhì)。3．PH對細(xì)胞染色的影響細(xì)胞各種成分均由蛋白質(zhì)構(gòu)成，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境中正電荷增多易與伊紅結(jié)合染色偏紅；在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多，易與美藍(lán)或天青結(jié)合，染色偏藍(lán)，因此細(xì)胞染色對氫離子濃度十分敏感，在染色過程中玻片必須清潔，配制瑞氏染

7、液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇，稀釋染液必須用緩沖液，沖洗水應(yīng)近中性，否則各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常，致使細(xì)胞的識別困難，甚至造成錯誤?！狙?xì)胞發(fā)育規(guī)律】血細(xì)胞在分化成熟過程中，其形態(tài)和大小的變化基本上有一個共同的規(guī)律：1．胞體：隨著血細(xì)胞的發(fā)育成熟，胞體由大逐漸變小，但巨核細(xì)胞系統(tǒng)則由小變大，原始粒細(xì)胞至早幼粒細(xì)胞也逐漸由小變大。2．胞核（1）大?。河纱笞冃。t細(xì)胞系統(tǒng)例外，成熟紅細(xì)胞核消失。（2）形狀：圓形變?yōu)椴灰?guī)則形；粒細(xì)胞核呈分葉狀；淋巴與漿細(xì)胞系統(tǒng)變化不大。（3）染色質(zhì)：細(xì)致、疏松逐漸變?yōu)榇植凇⒕o密。（4）核膜：不明顯變?yōu)槊黠@；原

8、淋巴細(xì)胞核膜最厚；原幼粒細(xì)胞核膜最薄；原始單核細(xì)胞介于兩者之間。（5）核仁：由有至無。清楚的核仁是原始和比較原始細(xì)胞的重要標(biāo)記，呈淡藍(lán)色，隨著細(xì)胞的成熟而消失。3．胞漿（1）量：有少到多。（2）顏色：深藍(lán)到淺藍(lán)，見于淋巴細(xì)胞與漿細(xì)胞。紅細(xì)胞與粒細(xì)胞的胞漿各逐漸變成桔紅和粉紅色。（3）顆粒：一般從無到少并