實(shí)驗(yàn)室常用試劑、緩沖液的配制方法

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1、附錄一實(shí)驗(yàn)室常用試劑、緩沖液的配制方法(一)1MTris-HCl(1L)1.稱量121.1gTris置于1L燒杯中2.加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙猓?.按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值；PH值濃HCl7.4約70mL7.6約60mL8.0約42mL4.將溶液定容至1L；5.高溫高壓滅菌后，室溫保存；注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1°C，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。(二)0.5MEDTA(1L)1.稱取186.1gNa2EDTA·2H2O，置于1L燒杯中；2.加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢瑁?/p>

2、3.用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0(約20gNaOH)；注意：pH值至8.0時(shí)，EDTA才能完全溶解；4.加去離子水將溶液定容至1L；5.適量分成小份后，高溫高壓滅菌；6.室溫保存。(三)50×TAEBuffer(pH8.5)(1L)1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中；Tris242gNa2EDTA.2H2O37.2g2.向燒杯中加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙猓?.加入57.1mL的醋酸，充分?jǐn)嚢瑁?.加去離子水將溶液定容至1L后，室溫保存。(一)10×TBEBuffer(pH8.3)(1L)1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中；Tris108gNa2EDTA.2H2O7.44g硼

3、酸55g2.向燒杯中加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙猓?.去離子水將溶液定容至1L后，室溫保存。(二)40%丙烯酰胺(1L)1.稱量下列試劑，置于2L燒杯中；丙烯酰胺Alrylamatide380g甲叉丙烯酰胺Bis-Alrylamatide20g2.向燒杯中加入約400mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙猓?.去離子水將溶液定容至1L；4.37°C過(guò)夜，充分溶解。(三)8%非變性聚丙烯酰胺凝膠(70mL)1.40%丙烯酰胺、TEMED和10%APS均放置于4°C冰箱中，要用時(shí)才取出；2.按照順序稱量下列試劑，置于200mL燒杯中；去離子水41mL5×TBEBuffer14mL40%

4、丙烯酰胺14mL10%APS650μLTEMED65μL3.磁力攪拌器將其充分混合均勻(注意控制時(shí)間，特別是室溫高的時(shí)候，容易凝結(jié))；1.將其緩慢倒入電泳玻璃板中。(一)6×LoadingBuffer(500mL，DNA電泳用)1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中；EDTA4.4gBromophenolBlue250mgXyleneCyanolFF250mg2.向燒杯中加入約200mL的去離子水，加熱充分?jǐn)嚢枞芙猓?.加入180mL甘油后，使用2NNaOH調(diào)節(jié)pH值至7.0；4.去離子水將溶液定容至500mL后，室溫保存。(二)10×LoadingBuffer(10mL，RNA電泳用)1

5、.稱量下列試劑，置于10mL離心管中；0.5MEDTA(pH8.0)200μLBromophenolBlue25mgXyleneCyanolFF25mg2.向燒杯中加入約4mL的DEPC處理水，充分?jǐn)嚢枞芙猓?.加入5mL甘油后，充分溶解；4.DEPC處理水定容至10mL后，室溫保存。(三)組織裂解液(100mL，魚類用)1.按照順序稱量下列試劑，置于200mL燒杯中；1MTris-Cl(pH8.0)1mL0.5MEDTA1mL0.5MNaCl20mL10%SDS10mL2.加去離子水將溶液定容至100mL。(四)Hank’s液(1L，淡水魚用)1.按照順序稱量下列試劑，置于2L燒杯

6、中；NaCl8.0gKCl0.2gMgSO4.7H2O0.26gNaH2PO4.2H2O0.065gNaHCO31.0gCaCl20.2g2.充分?jǐn)嚢柚燎安咳芙猓?.加去離子水將溶液定容至1000mL，4°C保存。