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《its菌種鑒定方 法》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、利用ITS進行菌種鑒定是目前較多采用的方法。ITS是內(nèi)源轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(InternallyTranscribedSpacer)的英文縮寫,位于rRNA編碼基因18S,5.8S和28S之間的小基因片段。其優(yōu)點有:具有高拷貝數(shù),整個序列的長度在600～800bp，利用rDNA通用引物能夠很容易被擴增出來；同時包含保守與變異序列,能根據(jù)保守序列中的變異位點設計特殊引物進行特異性擴增比較，rRNA基因(rDNA)在微生物的鑒定應用中，具有檢測微生物種水平的多態(tài)性特征。這些rDNA高度保守地分布在染色體的不同位置，在每
2、個單倍染色體基因組中的拷貝數(shù)超過200個,這使得保守區(qū)域能夠很容易被擴增出來。每個重復的rDNA序列的存在方式為由一前一后的18SrDNA小亞基單元(SSU),5.8SrDNA,28SrDNA大亞基單元(LSU)組成,已設計出通用引物來擴增ITS序列分析相關(guān)真菌種水平之間的差異。本研究通過絲狀真菌ITS保守序列的擴增,同源序列的對比分析,結(jié)合傳統(tǒng)鑒定方法,對從土壤中分離篩選的一株絲狀真菌進行了分析鑒定,并對鑒定結(jié)果和方法進行了比較分析。種內(nèi)變異還顯示在rDNA基因間內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)Ⅰ和Ⅱ（分別為ITSⅠ和ITS
3、Ⅱ）的片段大小上。ITS區(qū)在核糖DNA中進化較快，可在同一屬間甚至群體間發(fā)生變化。其中ITSⅡ區(qū)在種間變異性較高（22％），種內(nèi)變異性較低（＜3％）。選擇的兩對引物均以ITS區(qū)的序列為靶目標，其中引物①（ITS1和ITS4）擴增的是ITSⅠ區(qū)、5.8SrDNA和ITSⅡ區(qū)的基因序列，可以鑒別出念珠菌屬的3個菌種；引物②（ITS4和ITS86）擴增的是5.8SrDNA和28SrDNA之間的ITSⅡ區(qū)的保守順序，可以鑒別出念珠菌屬的7個菌種。因而筆者更推薦采用引物②，它不僅有很強的通用性，能識別更多菌種，而且具
4、有更高的屬種特異性。1、通用引物①：ITS15'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG一3’ITS45'-TCCTCCGCTTATTGATATGC一3’通用引物②ITS45'-TCCTCCGCTTATTGATATGC一3’ITS865'-GTGAATCATCGAATCTTTGAAC一3’
