生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸與2,4—二硝基苯肼作用，生成丙酮酸二硝

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1、實(shí)驗(yàn)6丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(A1aninetransaminase,ALT)活性測(cè)定ALT:AlaninetransaminaseGTP:Glutamatepyruvatetransaminase一、目的要求了解血清ALT的測(cè)定原理及意義。二、實(shí)驗(yàn)原理基質(zhì)液中丙氨酸和α—酮戊二酸在一定溫度和時(shí)間內(nèi)，經(jīng)血清中ALT的作用，生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸與2,4—二硝基苯肼作用，生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯紅棕色。根據(jù)顯色的深淺反映出血清中ALT活性的強(qiáng)弱。其反應(yīng)式如下：α－ketoglutaratepyruvicacidGlutamicacidpyruvicacidAlanineALT紅棕色三、操作

2、步驟取4只小試管按下表加入試劑：標(biāo)準(zhǔn)管(D1)標(biāo)準(zhǔn)空白(D2)測(cè)定管(D3)測(cè)定空白(D4)丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液(100μg/ml)0.1000血清000.10.1基質(zhì)液*0.50.50.50PH7.4磷酸鹽緩沖液00.100置于37℃水浴或溫箱中30min后取出2.4-二硝基苯肼0.50.50.50.5基質(zhì)液(mL)0000.5ALT活性測(cè)定試劑加入方法Control210μgpyruvateα－ketoglutarateOD1Control110μgpyruvateOD1-OD2α－ketoglutarateOD2D2XμgpyruvateserumOD3D1XμgpyruvateOD3-OD4s

3、erumOD4OD1-OD2OD3-OD410μgXμg＝OD1-OD2OD3-OD410X(μg)＝×四、結(jié)果與計(jì)算本法所規(guī)定的ALT活性單位的定義是：1ml血清在37℃水浴中保溫30min，與基質(zhì)液作用后產(chǎn)生2.5μg丙酮酸，稱為一個(gè)ALT單位。計(jì)算時(shí)，須先算出0.1ml血清于37℃下所產(chǎn)生丙酮酸的微克數(shù),公式(1)。再根據(jù)其單位定義換算為每毫升血清內(nèi)ALT活力單位,公式(2)。OD1-OD2OD3-OD410X(μg)＝×ALTunitspermillilitreserum=pyruvicacid(μg)2.5×10.1本法ALT正常值為2~40活力單位。五、應(yīng)用意義ALT廣泛存在于組織

4、細(xì)胞中，肝中特多。當(dāng)肝細(xì)胞損傷時(shí)，此酶即釋放入血，血中酶活性大大升高。臨床上常用來(lái)測(cè)定肝功能。ALT顯著增高見(jiàn)于各種肝炎急性期及藥物中毒性肝細(xì)胞損壞。